Question

13．如圖圖一是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素的主要流程圖，圖二是生產(chǎn)過程中所制備的帶有目的基因供體DNA分子及載體（質(zhì)粒）的示意圖．箭頭所指為相應限制性核酸內(nèi)切酶的識別位點，Tet^r表示四環(huán)素抗性基因，Tet^r上游有基因C，只有存在基因C的表達產(chǎn)物時Tet^r基因才能表達．請回答下列問題：

（1）圖一中的供體細胞是人的某種體細胞．
（2）圖一中第②步中需要的酶是反轉錄酶（逆轉錄酶），第③步中需要的工具酶是限制酶和DNA連接酶，第④步常用鈣離子處理大腸桿菌細胞，使其處于容易吸收周圍DNA的感受態(tài)．
（3）若圖一所示過程中以Tet^r為標記基因，則第③步中應選用SmaⅠ和PstⅠ對供體DNA和質(zhì)粒進行切割；為檢測轉化結果，將經(jīng)第④步處理后的大腸桿菌培養(yǎng)液接種到含有四環(huán)素培養(yǎng)基上，長出的菌落就是成功插入目的基因的菌落．
（4）檢測目的基因能否在大腸桿菌細胞中表達，常用的方法為抗原-抗體雜交法．

Answer 1

分析 圖一是利用基因工程生產(chǎn)人胰島素過程，①過程獲取的單鏈核酸是RNA，②是逆轉錄獲得DNA過程，③是基因表達載體的構建，④是利用Ca²⁺轉化法將目的基因?qū)�入農(nóng)桿菌，⑤是將農(nóng)桿菌侵染煙草細胞，⑥是植物組織培養(yǎng)獲得轉基因植株．

解答 解：（1）分析圖解可以看出，圖一中的供體細胞是人的某種體細胞．
（2）圖一中第②步表示逆轉錄過程，該過程需要逆轉錄酶，基因表達載體的構建過程中需要限制酶和DNA連接酶，第④步常用鈣離子處理大腸桿菌細胞，使其處于容易吸收周圍DNA的感受態(tài)．
（3）只有存在基因C的表達產(chǎn)物時Tet^r基因才能表達，因此若圖一所示過程中以Tet^r為標記基因，則第③步中應選用SmaⅠ和PstⅠ對供體DNA和質(zhì)粒進行切割，這樣可以保證C基因的正常表達；標記基因是四環(huán)素抗性基因，所以在含有四環(huán)素的培養(yǎng)基上培養(yǎng)大腸桿菌．
（4）檢驗目的基因在煙草細胞中是否成功表達的方法是抗原-抗體雜交．
故答案為：
（1）人的某種體細胞       
（2）反轉錄酶（逆轉錄酶）  限制酶和DNA連接酶   感受
（3）SmaⅠ和PstⅠ四環(huán)素     
（4）抗原-抗體雜交法

點評 本題考查基因工程，解題關鍵：①理解基因工程操作過程．②能理解題意“基因C”的作用和 基因表達載體的構建方法．