Question

16．某興趣小組采用稀釋涂布平板法對牛奶樣品中的微生物進行計數(shù)，步驟如下．回答下列問題：
（1）梯度稀釋：每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次，目的是使微生物和無菌水混合均勻．
（2）涂布平板：取0．lmL稀釋液，選用圖中的B均勻地涂布在牛肉膏蛋白腺固體培養(yǎng)基表面，每個濃度下涂布三個平板．為避免雜菌污染，接種應在（酒精燈）火焰附近進行．可用未接種的培養(yǎng)基作為空白對照以檢驗培養(yǎng)基配制是否達標．

（3）培養(yǎng)與計數(shù)：將上述平板放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔12小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)，取菌落數(shù)穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目．在10⁴、10⁵、10⁶倍稀釋時的統(tǒng)計結(jié)果記錄如表：

稀釋倍數(shù) 菌落數(shù)平均值（個） 時間	12h	24h	36h	48h
104	26	310	421	421
103	8	36	50	50
106	0	4	6	6

計算得每毫升牛奶樣品中細菌數(shù)大約是5×l0⁷個．這種方法統(tǒng)計的活菌數(shù)往往比實際數(shù)目低，原因是當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落．除此以外，顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法，此方法需要使用血細胞計數(shù)板．

Answer 1

分析 稀釋涂布法：是將菌液進行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，在適宜條件下培養(yǎng)．在稀釋度足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個細胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落．

解答 解：（1）梯度稀釋過程中，為了使微生物和無菌水混合均勻，每次取樣前需用手指輕壓移液管上的橡皮頭，吹吸三次．
（2）圖中A為接種環(huán)、B為涂布棒、C為吸管、D為接種針，涂布平板時，需要使用涂布棒將菌液均勻地涂布在牛肉膏蛋白腺固體培養(yǎng)基表面，每個濃度下涂布三個平板．為避免雜菌污染，接種應在（酒精燈）火焰附近進行．可用未接種的培養(yǎng)基作為空白對照以檢驗培養(yǎng)基配制是否達標．
（3）將上述平板放入恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每隔12小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)，取菌落數(shù)穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，防止因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目．菌落計數(shù)是應選擇30～300菌落數(shù)進行計算，表格數(shù)據(jù)均為平均值，因此利用表格中稀釋倍數(shù)為10⁵的進行計算，每毫升牛奶樣品中細菌數(shù)大約=50×10⁵÷0.1=5×l0⁷個．當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此這種方法統(tǒng)計的活菌數(shù)往往比實際數(shù)目低．除此以外，顯微鏡直接計數(shù)也是測定微生物數(shù)量的常用方法，此方法需要使用血細胞計數(shù)板．
故答案為：
（1）使微生物和無菌水混合均勻
（2）B     （酒精燈）火焰    未接種
（3）因培養(yǎng)時間不足而導致遺漏菌落的數(shù)目    5×l0⁷
當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落      顯微鏡直接計數(shù)

點評 本題考查微生物分離和培養(yǎng)，對于此類試題，需要考生注意的細節(jié)較多，如實驗的原理、實驗采用的方法、實驗步驟等，需要考生在平時的學習過程中注意積累．