Question

8．某科研小組自制兩種大蒜搗取液，探究它對餐具上細菌的殺滅效果，具體過程如下，請完善相關步驟：
（1）制作提取液：做法見表

編號	A組	B組
經消毒的大蒜（g）	350	350
無菌水（mL）	900	880
無菌食醋（mL）	/	20

表中A組無菌水需加入900ml
（2）取樣：
①取污染程度一致的餐具若干，隨機等分為甲、乙、丙三組．
②將經過滅菌處理的濾紙，貼在甲組餐具表面1min，再將該濾紙放入50ml無菌水中，充分振蕩后制成細菌原液1；
③將乙、丙兩組的餐具分別浸泡在等量的A組和B組提取液中后取出用無菌水的緩水流沖洗10s；
④將經過滅菌處理的濾紙，分別貼在浸泡后的乙、丙兩組餐具表面各lmin，再將濾紙分別放入兩瓶50ml無菌水中，充分振蕩后制成細菌原液2、細菌原液3．
（3）培養(yǎng)和計數(shù)：采用稀釋涂布平板法法分離三種原液中的細菌，且每個濃度至少涂布3個平板．制成的平板放在37℃培養(yǎng)48h，取出計數(shù)．
（4）本實驗需另設一組，用等量無菌水涂布在未接種細菌的空白平板上，目的是檢測平板滅菌是否徹底．
（5）現(xiàn)察記錄：在下面空白處，設計A組大蒜提取液處理前后，細菌原液經適當稀釋后的菌落數(shù)觀察記錄表．

原液 菌落數(shù) 組別	1號	2號	3號	平均值
細菌原液1
細菌原液2

．

Answer 1

分析 兩種純化細菌的方法的比較

	優(yōu)點	缺點	適用范圍
平板劃 線分離法	可以觀察菌落特征，對混合菌進行分離	不能計數(shù)	適用于好氧菌
稀釋涂布 平板法	可以計數(shù)，可以觀察菌落特征	吸收量較少，較麻煩，平板不干燥效果不好，容易蔓延	適用于厭氧，兼性厭氧

檢測細菌總數(shù)，可以看出采用的計數(shù)方法是稀釋涂布平板法進行計數(shù)．用稀釋涂布平板法測定同一樣品中的細菌數(shù)時，在每一個梯度濃度內，至少要涂布3個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進行記數(shù)，求其平均值，再通過計算得出細菌總數(shù)．

解答 解：（1）由制備大蒜提取液的表格可知，B組加了880ml的無菌水和20ml的無菌食醋，A組不加食醋只加無菌水，為了保證無關變量相同且適宜，加無菌水的量應是880+20=900ml．
（2）取樣：
①取污染程度一致的餐具若干，隨機等分為甲、乙、丙三組．
②將經過滅菌處理的濾紙，貼在甲組餐具表面1min，再將該濾紙放入50ml無菌水中，充分振蕩后制成細菌原液1；
③將乙、丙兩組的餐具分別浸泡在等量的A組和B組提取液中后取出用無菌水的緩水流沖洗10s；
④將經過滅菌處理的濾紙，分別貼在浸泡后的乙、丙兩組餐具表面各lmin，再將濾紙分別放入兩瓶50ml無菌水中，充分振蕩后制成細菌原液2、細菌原液3．
（3）對微生物進行培養(yǎng)并進行計數(shù)應采用稀釋涂布平板法，且每個濃度至少涂布3個平板．制成的平板放在37℃培養(yǎng)48h，取出計數(shù)．
（4）本實驗需另設一組，用等量無菌水涂布在未接種細菌的空白平板上，目的是檢測平板滅菌是否徹底．
（5）現(xiàn)察記錄：

原液 菌落數(shù) 組別	1號	2號	3號	平均值
細菌原液1
細菌原液2

．
故答案為：
（1）900
（3）稀釋涂布平板法    3
（4）未接種細菌的空白檢測平板滅菌是否徹底
（5）

原液 菌落數(shù) 組別	1號	2號	3號	平均值
細菌原液1
細菌原液2

點評 本題考查了微生物的分離與培養(yǎng)的有關知識，要求考生能夠掌握分離微生物和統(tǒng)計活菌數(shù)常用的接種方法和接種工具，實驗設置的單因子變量原則、對照原則、重復實驗的原則，主要考查學生設計和完善實驗步驟，分析實驗結果獲取結論的能力．