Question

【題目】轉(zhuǎn)基因生物可用于生產(chǎn)人類所需要的藥用蛋白，如激素、抗體、疫苗、酶等。下圖甲是通過(guò)生物工程培育能產(chǎn)生人胰島素的煙草的過(guò)程。請(qǐng)據(jù)圖回答下列問(wèn)題：

（1）基因工程的核心步驟是 （填字母）。此過(guò)程所需的工具酶是 。

（2）下圖乙是載體和反轉(zhuǎn)錄得到的胰島素基因的片段，已知限制酶Ⅰ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—G↓GATCC—，限制酶Ⅱ的識(shí)別序列和切點(diǎn)是—↓GATC—。Gene Ⅰ和Gene Ⅱ為質(zhì)粒上的標(biāo)記基因，根據(jù)圖示分析，應(yīng)用限制酶 切割質(zhì)粒，用限制酶 切割目的基因。構(gòu)建的重組質(zhì)粒中，除含有外源基因、標(biāo)記基因外，還必須含有 。

（3）B過(guò)程中，常用 處理使細(xì)菌成為感受態(tài)細(xì)胞，從而利于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。

（4）如果從分子水平檢測(cè)人胰島素基因是否表達(dá)成功，可以采用 方法。

Answer 1

【答案】（1）A 限制酶和DNA連接酶

（2）Ⅰ Ⅱ 啟動(dòng)子 終止子

（3）Ca2＋

（4）抗原—抗體雜交

【解析】

試題分析：（1）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即A過(guò)程，該過(guò)程首先需要限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，還需用DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA分子。

（2）用限制酶Ⅱ切割質(zhì)粒時(shí)會(huì)將兩個(gè)標(biāo)記基因都破壞，因此只能選用限制酶Ⅰ切割質(zhì)粒，而切割含有目的基因的外源DNA分子時(shí)，只需用限制酶Ⅱ即可。構(gòu)建的重組質(zhì)粒中，除含有外源基因、標(biāo)記基因外，還必須含有啟動(dòng)子和終止子。

（3）將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時(shí)，常用感受態(tài)細(xì)胞法，即常用Ca2+處理使細(xì)菌成為感受態(tài)細(xì)胞，從而利于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。

（4）從分子水平上檢測(cè)目的基因是否表達(dá)成功，可以采用抗原-抗體雜交方法。