Question

【題目】某研究小組對自來水和污染河水水樣中的大腸桿菌含量進行了測定�；卮鹣铝袉栴}：

（1）檢測自來水中大腸桿菌的數(shù)量，可選用伊紅美藍培養(yǎng)基。該培養(yǎng)基除了為大腸桿菌的生長、繁殖提供水和氮源外，還要提供__________________（答出兩點）等基本營養(yǎng)成分；制備該培養(yǎng)基時應在滅菌之____（填“前”或“后”）調(diào)整pH至7.6，以滿足大腸桿菌生長的要求；該培養(yǎng)基中加入伊紅美藍的作用是______________________________。

（2）研究小組使用“濾膜法”對污染嚴重的河流水體進行大腸桿菌活菌數(shù)的測定，需將水樣進行適當稀釋，如取水樣1mL加入_________mL制備稀釋倍數(shù)為10倍的稀釋液，并照此依次制備更高倍數(shù)的稀釋液。取每個稀釋倍數(shù)的菌液5mL進行過濾，然后將濾膜放置在伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)。如果經(jīng)過培養(yǎng)后，稀釋倍數(shù)為103對應的4個平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48個，那么每升河水約含大腸桿菌____________個。

（3）用上述方法統(tǒng)計樣本中菌落數(shù)時需要設置對照組。若在調(diào)查中，某一實驗組平板上菌落數(shù)平均數(shù)為46個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，請分析說明空白對照組出現(xiàn)菌落的可能性原因________________________________________________（答出三點即可）。若將40（即46-6）個/平板作為實驗組菌落數(shù)的平均值進行計算，則該做法________（填“正確”或“不正確”）。

Answer 1

【答案】碳源和先機鹽 前 使大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，便于對大腸桿菌計數(shù) 無菌水9 9×l06 培養(yǎng)基滅菌不合格、倒平板過程被污染、培養(yǎng)皿滅菌不合格等 不正確

【解析】

微生物培養(yǎng)基的配方中，一般都含有水、碳源、氮源和無機鹽。平板培養(yǎng)基配制的基本流程為：計算→稱量→溶化→調(diào)節(jié)pH→滅菌→倒平板。在對水樣進行系列稀釋操作時，可先在第一支試管中注入1mL水樣與9mL無菌水，配成稀釋倍數(shù)為10倍的稀釋液，然后用移液管移從10倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液注入到第二支試管中，再在第二支試管中加入9mL無菌水，配成稀釋倍數(shù)為100倍的稀釋液，并照此依次制備更高倍數(shù)的稀釋液。計算樣品菌液中的菌株數(shù)時，每克樣品中的菌株數(shù)＝（C÷V）×M，其中C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（mL），M代表樣品菌液的稀釋倍數(shù)。為了檢測培養(yǎng)基平板滅菌是否合格，可隨機取若干滅菌后的空白平板進行對照培養(yǎng)一段時間，觀察菌落的有無。用稀釋涂布平板法測定同一樣品中的細菌數(shù)時，為了保證結(jié)果準確，在每一個梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個平板，確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行記數(shù)，求其平均值。

(1) 微生物培養(yǎng)基成分應包括水、氮源、碳源和無機鹽等。制備該培養(yǎng)基時應在滅菌之前調(diào)整pH。含伊紅美藍的培養(yǎng)基為鑒別培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基中加入伊紅美藍的作用是：使大腸桿菌的菌落呈現(xiàn)黑色，便于對大腸桿菌計數(shù)。

(2) 制備稀釋倍數(shù)為10倍的稀釋液，需取水樣1mL加入無菌水9 mL。取每個稀釋倍數(shù)的菌液5mL進行過濾，然后將濾膜放置在伊紅美藍培養(yǎng)基上培養(yǎng)。如果經(jīng)過培養(yǎng)后，稀釋倍數(shù)為103對應的4個平板上菌落數(shù)分別為43、47、42、48個，那么每升河水約含大腸桿菌的數(shù)目是[(43＋47＋42＋48)÷4]÷5×103×103＝9×106個。

(3) 若在調(diào)查中，某一實驗組的平板上菌落數(shù)平均數(shù)為46個/平板，而空白對照組的一個平板上出現(xiàn)了6個菌落，則空白對照組出現(xiàn)菌落可能性原因是：培養(yǎng)基滅菌不合格、倒平板過程被污染、培養(yǎng)皿滅菌不合格等。為了保證結(jié)果準確，測定同一樣品中的細菌數(shù)時，應在每一個梯度濃度內(nèi)至少要涂布3個平板，確定對照組無菌后，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行記數(shù)，求其平均值，因此若將40（即46-6）個/平板作為實驗組菌落數(shù)的平均值進行計算，則該做法是不正確的。