Question

18．關于科學探究問題
在農業(yè)生產中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤．為修復被該除草劑污染的土壤，需要選育能高效降解該除草劑的細菌．
請完成下列選育的實驗方案：
步驟一：菌種浸出液的制備：
（1）從使用過除草劑的土壤中獲取一定量的樣本，然后置于無菌水中，震蕩一定時間，備用．
步驟二：配置菌種選育培養(yǎng)基并滅菌：
所配制的培養(yǎng)基的特點是固體和含不同濃度除草劑．
步驟三：
（1）劃線接種
（2）在適宜的溫度等條件進行倒置培養(yǎng)一定時間．
（3）觀察選取在較高濃度下除草劑的培養(yǎng)基中大菌落．
（2）常用的接種劃線工具是接種環(huán)．
某同學在純化菌株時，劃線接種后一段時間后，平板的第一劃線區(qū)域長滿致密的菌苔，第二劃線區(qū)域無菌落，造成劃線無菌落可能的操作失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻或接種劃線未從第一區(qū)域開始．

Answer 1

分析 從土壤中分離微生物的一般步驟是：土壤取樣、選擇培養(yǎng)、梯度稀釋、涂布培養(yǎng)和篩選菌株．從土壤中分離目的菌要用固體的選擇培養(yǎng)基；培養(yǎng)液中缺少大部分細菌可利用的氮源或有氧條件抑制了大部分細菌的生長；在固體培養(yǎng)基中，無透明帶菌落利用的氮源主要是氮氣；有透明帶菌落利用的氮源主要是除草劑，據此可篩選出目的菌．

解答 解：（1）步驟一：由于該除草劑為含氮有機物，所以篩選能高效降解該除草劑的細菌，應在使用過除草劑的土壤取樣，并使用含該除草劑為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基．
步驟二：所配制的培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基并需要配置含不同濃度除草劑的培養(yǎng)基．
步驟三：
   （2）接種后應該進行培養(yǎng)，即在適宜的溫度等條件進行倒置培養(yǎng)一定時間．
   （3）觀察選取在較高濃度下除草劑的培養(yǎng)基中大菌落．
（2）平板劃線法的接種工具是接種環(huán)．根據題意分析，該同學的失誤是接種環(huán)灼燒后未冷卻組成菌種燙死，或接種劃線未從第一區(qū)域開始，即二次劃線起始時就沒有菌種．
故答案為：
（1）使用過除草劑的土壤     固體   含不同濃度除草劑
（2）在適宜的溫度等條件進行倒置培養(yǎng)一定時間
觀察選取在較高濃度下除草劑的培養(yǎng)基中大菌落
（3）接種環(huán)      接種環(huán)灼燒后未冷卻或接種劃線未從第一區(qū)域開始

點評 微生物培養(yǎng)的實驗，是“生物知識內容表”所列的生物實驗，包括理解實驗目的、原理、方法和操作步驟，考生需掌握相關的操作技能，并能將這些實驗涉及的方法和技能進行綜合運用及實驗分析能力．