Question

【題目】回答下列第(一）、（二)小題：

(一)耐高溫淀粉酶在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中有很大的實(shí)用性。如圖表示從熱泉的嗜熱菌樣品中進(jìn)行篩選分離菌種，經(jīng)過(guò)耐高溫淀粉酶的提純和固定化后，用于工業(yè)化生產(chǎn)的過(guò)程。請(qǐng)回答：

（1）①過(guò)程進(jìn)行的操作為________________，②過(guò)程實(shí)施的是_______________分離法；可根據(jù)Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基上________的大小，來(lái)確定需擴(kuò)大培養(yǎng)的目標(biāo)菌種。

（2）Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基中除了加入淀粉外，還需加人另一種重要的營(yíng)養(yǎng)成分是_________(A.瓊脂B.葡萄糖C.硝酸銨D.碳酸氫鈉），并放在高溫條件下培養(yǎng)。

（3）將適量經(jīng)提純的耐高溫淀粉酶通過(guò)_______法固定在石英砂上，形成固定化酶柱，此后用一定濃度的淀粉溶液進(jìn)行過(guò)柱試驗(yàn)，可往流出液中滴加______溶液檢測(cè)酶的催化效果，但結(jié)果發(fā)現(xiàn)流出液顯藍(lán)色，請(qǐng)分析在上述操作中存在的可能原因是_______(至少寫出兩點(diǎn)）。

(二)通過(guò)轉(zhuǎn)基因技術(shù)培育出乳汁中含人β-酪蛋白的山羊，其流程如下圖�；卮鹩嘘P(guān)問(wèn)題。

（1）基因工程的核心是圖中的__________(用圖中數(shù)字回答）過(guò)程；如果要利用人類基因組構(gòu)建含β-酪蛋白因的基因文庫(kù)，該過(guò)程______(填“需要”或“不需要”）限制性核酸內(nèi)切酶參與。若要檢測(cè)乳汁中是否出現(xiàn)人β-酪蛋白，可用的檢測(cè)物質(zhì)是________(填“人β-酪蛋白基因”或“人β-酪蛋白抗體”）。

（2）②過(guò)裎一般是通過(guò)_________法實(shí)現(xiàn)的。當(dāng)形成轉(zhuǎn)基因受精卵后，需要經(jīng)過(guò)一段時(shí)間的體外培養(yǎng)，這一過(guò)程中不需要的措施是___________(A.培養(yǎng)液中加入動(dòng)物血清 B.培養(yǎng)液要及時(shí)更換成分 C.加入飼養(yǎng)層細(xì)胞 D.放在C02培養(yǎng)箱中）。

（3）③過(guò)程的實(shí)現(xiàn)必須通過(guò)________技術(shù)；通過(guò)④過(guò)程實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因山羊的克隆繁殖，要通過(guò)______技術(shù)形成重組細(xì)胞后，再經(jīng)胚胎工程實(shí)現(xiàn)。

Answer 1

【答案】 稀釋 涂布 菌落周圍透明圈 C 吸附 KI-I2 固定化操作后未用蒸餾水洗滌；要取反應(yīng)一段時(shí)間后的流出液進(jìn)行顯色反應(yīng)；液體過(guò)柱的流速過(guò)快等 ① 需要 人β-酪蛋白抗體 顯微注射 C 胚胎移植 核移植

【解析】試題分析：據(jù)題（一）圖分析，①過(guò)程是梯度稀釋，②過(guò)程是稀釋涂布平板法接種，目的是篩選單菌落；從功能上看，Ⅰ號(hào)培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基，從物理狀態(tài)上來(lái)說(shuō)，Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基；采用的接種方法有稀釋涂布平板法和平板劃線法；常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌。根據(jù)題（二）圖分析，①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，②表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，③表示胚胎移植過(guò)程，④表示胚胎分割移植。

（一）（1）根據(jù)以上分析已知，①過(guò)程為梯度稀釋，②過(guò)程的接種方法為稀釋涂布平板法；部分嗜熱菌在Ⅰ培養(yǎng)基上生長(zhǎng)時(shí)可產(chǎn)生淀粉酶，分解培養(yǎng)基中的淀粉后會(huì)在菌落周圍形成透明圈，透明圈越大，說(shuō)明產(chǎn)生的淀粉酶越多，應(yīng)挑選透明圈大的菌落接種的Ⅱ號(hào)培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)。

（2）在培養(yǎng)微生物的培養(yǎng)基中，碳源和氮源必不可少，所以除淀粉外還應(yīng)加入硝酸銨作為氮源。

（3）由于酶分子較小，因此固定化酶一般用吸附法；固定化酶催化淀粉水解后流出的液體應(yīng)該不含淀粉，可往流出液中滴加KI-I2溶液檢測(cè)酶的催化效果；若發(fā)現(xiàn)流出液顯藍(lán)色，在上述操作中存在的可能原因是：固定化操作后未用蒸餾水洗滌；要取反應(yīng)一段時(shí)間后的流出液進(jìn)行顯色反應(yīng)；液體過(guò)柱的流速過(guò)快等。

（二）（1）基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，即圖中①過(guò)程；如果要利用人類基因組構(gòu)建含β-酪蛋白因的基因文庫(kù)，該過(guò)程需要限制性核酸內(nèi)切酶參與；若要檢測(cè)乳汁中是否出現(xiàn)人β-酪蛋白，可用抗原-抗體雜交法，因此可用的檢測(cè)物質(zhì)是人β-酪蛋白抗體。

（2）②表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞，一般用顯微注射法；受精卵培養(yǎng)過(guò)程中，培養(yǎng)液中加入動(dòng)物血清并及時(shí)更換成分，AB正確；不需要進(jìn)入飼養(yǎng)層細(xì)胞，C錯(cuò)誤；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)需要放入C02培養(yǎng)箱中，D正確。

（3）③表示胚胎移植過(guò)程；④過(guò)程實(shí)現(xiàn)轉(zhuǎn)基因山羊的克隆繁殖，要通過(guò)核移植技術(shù)形成重組細(xì)胞后，再經(jīng)胚胎工程實(shí)現(xiàn)。