Question

6．人和哺乳動(dòng)物的尿中含有尿素，環(huán)境中大量尿素的存在會(huì)造成污染．土壤中有些細(xì)菌含有脲酶，可通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源．某研究小組對(duì)土壤中的這類細(xì)菌進(jìn)行分離，用以回收氮源同時(shí)凈化環(huán)境．請(qǐng)回答下列相關(guān)問(wèn)題：
（1）分離培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)必須進(jìn)行無(wú)菌操作．培養(yǎng)基的滅菌一般采用高壓蒸汽滅菌法．配制培養(yǎng)基時(shí)，滅菌與調(diào)節(jié)pH的先后順序是先調(diào)PH，后滅菌．
（2）采用稀釋涂布平板法法將樣液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)．在稀釋土壤溶液的過(guò)程中每一步都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作．接種后的培養(yǎng)皿倒置于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)．
（3）用以尿素為唯一氮源培養(yǎng)基篩獲得能分泌脲酶的細(xì)菌，從功能上劃分該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基．若培養(yǎng)基中存在有脲酶的細(xì)菌，其菌落周圍會(huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是由于尿素被分解產(chǎn)生氨，遇培養(yǎng)基中加入的酚紅指示劑產(chǎn)生的顏色變化，從而證明這一菌株可以尿素為氮源．變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力越強(qiáng)．

Answer 1

分析 實(shí)驗(yàn)室常用的滅菌方法有灼燒滅菌（如接種環(huán)）、干熱滅菌（如培養(yǎng)皿）、高壓蒸汽滅菌（如培養(yǎng)基）等．無(wú)菌操作要求在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中操作都在酒精燈火焰附近進(jìn)行，以避免周圍微生物的污染．微生物接種的方法很多，最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法．稀釋涂布平板法則是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)．

解答 解：（1）培養(yǎng)基一般采用高壓蒸汽滅菌法滅菌．培養(yǎng)基制作時(shí)應(yīng)該先調(diào)整pH，再滅菌．
（2）采用稀釋涂布平板法將樣液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后接種培養(yǎng)；為避免雜菌污染，操作要在酒精燈火焰旁操作，為防止水蒸氣在皿蓋上凝結(jié)會(huì)產(chǎn)生水滴，培養(yǎng)皿需要倒置在恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)．
（3）篩選和分離尿素分解菌時(shí)，需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基．在培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑，尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶能夠?qū)⒛蛩胤纸獬砂笨墒筆H呈堿性而出現(xiàn)紅色環(huán)帶，變色區(qū)域越大，說(shuō)明其分解能力越強(qiáng)．
故答案為：
（1）高壓蒸汽滅菌    先調(diào)PH，后滅菌
（2）稀釋涂布平板法　酒精燈火焰　倒置
（3）以尿素為唯一氮源　選擇　紅色環(huán)帶　氨　越強(qiáng)

點(diǎn)評(píng) 本題以脲酶為素材，考查微生物的分離和培養(yǎng)、以氮素為氮源測(cè)定能生長(zhǎng)的細(xì)菌的數(shù)量，要求考生識(shí)記無(wú)菌技術(shù)，特別是實(shí)驗(yàn)室常用的消毒和滅菌方法；掌握培養(yǎng)基的種類，能應(yīng)用相應(yīng)的培養(yǎng)基對(duì)土壤中的含有脲酶的細(xì)菌進(jìn)行分離．