Question

9．線粒體是與細胞凋亡密切相關(guān)的細胞器．為研究蛋白B對家蠶細胞凋亡的影響，科研人員做了如下實驗．
（1）細胞色素c是線粒體內(nèi)膜上的重要電子傳遞體，參與有氧呼吸第三階段的生化反應．細胞受到凋亡信號的作用后，線粒體膜上的非特異性通道打開，引起線粒體膜的（離子）通透性發(fā)生改變，線粒體膜兩側(cè)離子（和質(zhì)子）的分布發(fā)生變化，導致線粒體膜電位下降或消失，使得細胞色素c 釋放出來，引發(fā)細胞凋亡．
（2）用生物堿H處理懸浮培養(yǎng)的家蠶細胞，處理不同時間后，用凝膠電泳方法測定細胞溶膠（細胞質(zhì)基質(zhì)）中細胞色素c的含量，結(jié)果如圖所示．

①由于細胞中微管蛋白的表達量相對穩(wěn)定（且豐富），在實驗中可作為標準物質(zhì)，以校準和消除由于細胞培養(yǎng)操作、細胞取樣量和細胞色素c的檢測方法等無關(guān)變量對實驗結(jié)果的影響．
②據(jù)圖分析，正常細胞的細胞溶膠中沒有（或“未能”）檢測到細胞色素c，由細胞溶膠中細胞色素c含量增加，分離的線粒體中細胞色素c含量下降判斷，隨著生物堿H 處理時間延長，細胞色素c逐漸釋放到細胞溶膠中．
（3）為研究蛋白B的功能，科研人員構(gòu)建蛋白B基因過量表達載體和蛋白B基因表達干擾載體，導人懸浮培養(yǎng)的家蠶細胞中，用生物堿H處理轉(zhuǎn)基因家蠶細胞，檢測到過量表達蛋白B的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量減少，抑制蛋白B基因表達的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量顯著增加，推測蛋白B抑制細胞色素c的釋放，進而抑制細胞凋亡．

Answer 1

分析 1、有氧呼吸的過程中，催化[H]氧化為H₂O的過程是有氧呼吸的第三階段，其場所是線粒體內(nèi)膜．
2、變量：實驗過程中可以變化的因素稱為變量，包括自變量、因變量和無關(guān)變量；自變量是想研究且可人為改變的變量稱為自變量；因變量是隨著自變量的變化而變化的變量稱為因變量； 無關(guān)變量是在實驗中，除了自變量外，實驗過程中存在一些可變因素，能對實驗結(jié)果造成影響，這些變量稱為無關(guān)變量．
3、基因工程的基本操作步驟主要包括目的基因的獲取→基因表達載體的構(gòu)建→將目的基因?qū)�入受體細胞→目的基因的檢測與鑒定四步．

解答 解：（1）有氧呼吸第三階段的場所是線粒體內(nèi)膜，由細胞色素c是線粒體內(nèi)膜上的重要電子傳遞體，可推測細胞色素c參與有氧呼吸第三階段的生化反應；細胞受到凋亡信號的作用后，線粒體膜上的非特異性通道打開，會引起線粒體膜的（離子）通透性發(fā)生改變，線粒體膜兩側(cè)離子（和質(zhì)子）的分布發(fā)生變化，導致線粒體膜電位下降或消失，使得細胞色素c 釋放出來，引發(fā)細胞凋亡．
（2）①在用生物堿H處理懸浮培養(yǎng)的家蠶細胞，處理不同時間后，用凝膠電泳方法測定細胞溶膠（細胞質(zhì)基質(zhì)）中細胞色素c的含量的實驗中，由于細胞中微管蛋白的表達量相對穩(wěn)定（且豐富），所以在實驗中可作為標準物質(zhì)，以校準和消除由于細胞培養(yǎng)操作、細胞取樣量和細胞色素c的檢測方法等無關(guān)變量對實驗結(jié)果的影響．
②分析題圖可知，正常細胞的細胞溶膠中沒有（或“未能”）檢測到細胞色素c，而據(jù)細胞溶膠中細胞色素c含量增加，分離的線粒體中細胞色素c含量下降可判斷，隨著生物堿H處理時間延長，細胞色素c逐漸釋放到細胞溶膠中．
（3）為研究蛋白B的功能，科研人員構(gòu)建蛋白B基因過量表達載體和蛋白B基因表達干擾載體，導人懸浮培養(yǎng)的家蠶細胞中，用生物堿H處理轉(zhuǎn)基因家蠶細胞，檢測到過量表達蛋白B的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量減少，而抑制蛋白B基因表達的細胞溶膠中細胞色素c的釋放量會顯著增加，據(jù)此可推測蛋白B抑制細胞色素c的釋放，進而抑制細胞凋亡．
故答案為：
（1）三    （離子）通透    離子（和質(zhì)子）
（2）①相對穩(wěn)定（且豐富）    檢測方法   
②沒有（或“未能”）    細胞溶膠中細胞色素c含量增加，分離的線粒體中細胞色素c含量下降
（3）生物堿H    抑制細胞色素c的釋放，進而抑制細胞凋亡

點評 本題以為了研究蛋白B對家蠶細胞凋亡的影響，科研人員所作的實驗為題材，考查細胞結(jié)構(gòu)和功能、基因工程操作步驟等知識，考生識記細胞結(jié)構(gòu)和功能、明確基因工程的操作步驟是解題的關(guān)鍵．