Question

3．科學(xué)家將擬南芥的抗寒基因（CBFl），轉(zhuǎn)入香蕉以獲得抗寒的香蕉品種．如圖是某質(zhì)粒載體上的Aac I、Xba I、EcoR I、Hind III四種限制酶的切割位點(diǎn)示意圖．
據(jù)圖回答問(wèn)題：
（1）在該實(shí)驗(yàn)中為構(gòu)建基因表達(dá)載體，用Sac I、Xba I切下CBFl基因后，對(duì)質(zhì)粒載體進(jìn)行切割的限制酶是SacI、XbaI，理由是用相同限制酶切割來(lái)源不同的DNA后，可產(chǎn)生相同的末端．
（2）連接CBFl基因到該質(zhì)粒載體后，作為基因表達(dá)載體的組成還必須有啟動(dòng)子和終止子．將重組質(zhì)粒導(dǎo)入香蕉細(xì)胞最用的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）為了鑒別受體細(xì)胞中是否含有CBFl基因，可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選．
（4）科學(xué)家將生長(zhǎng)健壯、苗齡一次的轉(zhuǎn)基因香蕉（實(shí)驗(yàn)組）與非轉(zhuǎn)基因香蕉（對(duì)照組）進(jìn)行低溫處理，鑒定兩組之間的抗寒性差異，如果實(shí)驗(yàn)組的抗寒能力明顯高于對(duì)照組，則說(shuō)明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質(zhì)品種．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)該用同種限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運(yùn)載體，因此為構(gòu)建基因表達(dá)載體，用Sac I、Xba I切下CBFl基因后，對(duì)質(zhì)粒載體進(jìn)行切割的限制酶也是Sac I、Xba I，這樣可以產(chǎn)生相應(yīng)的黏性末端，便于DNA連接酶將目的基因與運(yùn)載體連接形成重組DNA．
（2）因表達(dá)載體的組成包括啟動(dòng)子、終止子、目的基因、標(biāo)記基因等；將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞常用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）根據(jù)運(yùn)載體上的標(biāo)記基因（氨芐青霉素抗性基因）可知，鑒別受體細(xì)胞中是否含有CBFl基因可用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基進(jìn)行篩選．
（4）轉(zhuǎn)基因香蕉能抗寒，因此將生長(zhǎng)健壯、苗齡一次的轉(zhuǎn)基因香蕉（實(shí)驗(yàn)組）與非轉(zhuǎn)基因香蕉（對(duì)照組）進(jìn)行低溫處理，鑒定兩組之間的抗寒性差異，如果實(shí)驗(yàn)組的抗寒能力明顯高于對(duì)照組，則說(shuō)明獲得了抗寒的香蕉優(yōu)質(zhì)品種．
故答案為：
（1）Sac I、Xba I     用相同限制酶切割來(lái)源不同的DNA后，可產(chǎn)生相同的末端
（2）啟動(dòng)子和終止子    農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）氨芐青霉素
（4）低溫     實(shí)驗(yàn)組的抗寒能力明顯高于對(duì)照組

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理、概念、操作步驟等，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．