Question

回答有關(guān)生物工程的問題．
小鼠是實(shí)驗(yàn)室常用的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，如：利用小鼠制備抗X病毒單克隆抗體、利用小鼠進(jìn)行DNA重組研究中導(dǎo)致了“基因敲除”技術(shù)的出現(xiàn)．
用小鼠制備抗X病毒單克隆抗體．
（1）將小鼠等分為兩組，甲組定期間隔注射適量的含X病毒的溶液，其目的是

 

；乙組注射

 

（作對(duì)照）．
（2）為了保存有價(jià)值的雜交瘤細(xì)胞系，通常用超低溫將其凍存，請(qǐng)分析其原因

 

_．
用小鼠進(jìn)行DNA重組研究中形成的“基因敲除”技術(shù)，能“敲除”DNA分子上的特定基因．該技術(shù)的主要過程如下：
第一步：分離小鼠胚胎干細(xì)胞，這些細(xì)胞中含有需要改造的基因，稱“靶基因”．
第二步：獲取與“靶基因”同源的DNA片斷，利用特定技術(shù)在該DNA片段上插入neo^R基因（新霉素抗性基因）成為突變DNA（如圖），使該片段上的靶基因失活．

第三步：將插入neo^R基因（新霉素抗性基因）的靶基因轉(zhuǎn)移入胚胎干細(xì)胞，再通過同源互換，用失活靶基因取代兩個(gè)正常靶基因中的一個(gè)，完成對(duì)胚胎干細(xì)胞的基因改造．
第四步：將第三步處理后的胚胎干細(xì)胞，轉(zhuǎn)移到特定培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)．
其基本原理如下圖所示：
（3）第二步中neo^R基因插入靶基因使用的工具酶是

 

．neo^R基因不僅能使靶基因失活，還可作為

 

；“靶基因失活”的根本原因是

 

．
（4）從研究者成功獲得如上圖所示的“敲除”一個(gè)靶基因的胚胎干細(xì)胞，到將該細(xì)胞培育成“基因敲除”小鼠，運(yùn)用到的生物技術(shù)有

 

、

 

等．

Answer 1

考點(diǎn)：單克隆抗體的制備過程,基因工程的應(yīng)用

專題：

分析：據(jù)題干分析，實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖侵苽鋯慰寺】贵w，通常要進(jìn)行對(duì)照實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)組注入一定量的抗原，對(duì)照組注入等量不含抗原的溶液；把目的基因插入運(yùn)載體中通常用限制酶和DNA連接酶，通常一些特殊抗性的基因作為標(biāo)記基因；導(dǎo)入受體細(xì)胞內(nèi)沒有表達(dá)所需的產(chǎn)品原因通常是靶基因失活，即其中的脫氧核苷酸數(shù)量序列發(fā)生改變，不能正常表達(dá)；基因敲除的胚胎干細(xì)胞利用的技術(shù)有轉(zhuǎn)基因技術(shù)，動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，克隆技術(shù)，動(dòng)物胚胎移植技術(shù)等．

解答： 解：（1）實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖怯眯∈笾苽淇筙病毒單克隆抗體，將小鼠等分為兩組，甲組定期間隔注射適量的含X病毒的溶液，獲得能產(chǎn)生抗X病毒抗體的B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）；乙組注射 等量不含X病毒的溶液（作對(duì)照）．
（2）超低溫抑制酶活性，利于保存其特性，因此用超低溫凍存雜交瘤細(xì)胞．
（3）將neoR基因插入靶基因需要限制酶處理獲得相同的黏性末端，再加入DNA連接酶進(jìn)行連接，故使用的工具酶是基因工程中限制酶、DNA連接酶；neoR基因可作為標(biāo)記基因；“靶基因失活”是因?yàn)樵谠揇NA片段上插入neo^R基因，使得靶基因中的脫氧核苷酸數(shù)量序列發(fā)生改變，不能正常表達(dá)．
（4）獲得如上圖所示的“敲除”一個(gè)靶基因的胚胎干細(xì)胞到該細(xì)胞培育成“基因敲除”小鼠需轉(zhuǎn)基因技術(shù)、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)等．
故答案為：
（1）獲得能產(chǎn)生抗X病毒抗體的B淋巴細(xì)胞（漿細(xì)胞）
等量不含X病毒的溶液
（2）超低溫抑制酶活性，利于保存其特性
（3）限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）、DNA連接酶    標(biāo)記基因
靶基因中的脫氧核苷酸數(shù)量序列發(fā)生改變，不能正常表達(dá)
（4）克隆技術(shù)  轉(zhuǎn)基因技術(shù)（合理給分）

點(diǎn)評(píng)：此題考查了轉(zhuǎn)基因技術(shù)、細(xì)胞工程相關(guān)知識(shí)，屬于考綱理解和分析判斷層次，部分學(xué)生沒有理解題中如何獲得“敲除”一個(gè)靶基因的胚胎干細(xì)胞的過程，從而判斷失誤．