Question

【題目】【加試題】

Ⅰ．轉(zhuǎn)基因克隆豬已在我國(guó)培育成功。研究組首先從豬胚胎皮膚細(xì)胞中分離出纖維細(xì)胞，進(jìn)行體外培養(yǎng)。通過(guò)電穿孔的方法將構(gòu)建好的基因表達(dá)載體轉(zhuǎn)入纖維細(xì)胞，經(jīng)篩選后將轉(zhuǎn)基因纖維細(xì)胞進(jìn)行體細(xì)胞克隆，再將重組胚胎移入代孕母豬子宮內(nèi)，最終獲得轉(zhuǎn)基因克隆豬。請(qǐng)回答：

（1）在對(duì)豬纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的 ，以防止培養(yǎng)過(guò)程的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止 對(duì)細(xì)胞自身造成危害。

（2）篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞時(shí)，需要用到基因表達(dá)載體中的 。

（3）在進(jìn)行體細(xì)胞克隆前，先要從屠宰場(chǎng)收集豬卵巢，采集 ，并在體外培養(yǎng)成熟。然后將轉(zhuǎn)基因纖維細(xì)胞核注入 中，再經(jīng)過(guò)一系列過(guò)程獲得含有目的基因的重組胚胎。

（4）為了提高重組胚胎的利用率，可對(duì)處于 階段的胚胎進(jìn)行均等分割，再將重組胚胎移入代孕母豬子宮中繼續(xù)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因克隆豬。一般地，代孕母豬需要用激素處理處理，促使其 以利于受孕。

Ⅱ．土壤中有些細(xì)菌含有脲酶，可通過(guò)降解尿素作為其生長(zhǎng)的氮源。現(xiàn)對(duì)土壤中的這類(lèi)細(xì)菌進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)，請(qǐng)回答：

（1）分離培養(yǎng)細(xì)菌時(shí)必須進(jìn)行無(wú)菌操作，包括培養(yǎng)基和各種器皿都必須是無(wú)菌的，常用的滅菌方法有 （至少答2種）。

（2）可用 法分離純化得到能降解尿素的菌種。在接種活菌的過(guò)程中，要在 旁進(jìn)行操作，接種后的培養(yǎng)皿 于37℃的 中培養(yǎng)。

（3）用含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基篩選能分泌脲酶的細(xì)菌，若培養(yǎng)基中存在分解尿素的細(xì)菌，其菌落周?chē)鷷?huì)出現(xiàn)紅色環(huán)帶，這是由于尿素被分解產(chǎn)生的 使PH升高，使酚紅指示劑產(chǎn)生顏色變化，從而證明這一菌株以尿素為氮源。變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力 。

Answer 1

【答案】Ⅰ

（1）抗生素 細(xì)胞代謝產(chǎn)物積累

（2）標(biāo)記基因

（3）卵母細(xì)胞 去核卵細(xì)胞

（4）桑椹胚或囊胚 同期發(fā)情

Ⅱ

（1）高壓蒸氣滅菌、灼燒滅菌（或干熱滅菌）

（2）涂布分離 或劃線分離 酒精燈倒置 恒溫培養(yǎng)箱

（3）氨 越強(qiáng)

【解析】Ⅰ．（1）在對(duì)纖維細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，需要在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加一定量的抗生素，以防止培養(yǎng)過(guò)程的污染。此外，應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，防止細(xì)胞代謝產(chǎn)物的積累對(duì)細(xì)胞自身造成危害。

（2）篩選轉(zhuǎn)基因細(xì)胞時(shí)，需要用到基因表達(dá)載體中的標(biāo)記基因。

（3）在進(jìn)行體細(xì)胞克隆前，先要從屠宰場(chǎng)收集豬卵巢，采集卵母細(xì)胞，并在體外培養(yǎng)成熟。然后將轉(zhuǎn)基因纖維細(xì)胞注入到去核卵母細(xì)胞中，再經(jīng)過(guò)一系列過(guò)程獲得含有目的基因重組胚胎。

（4）為了提高重組胚胎的利用率，可以對(duì)處于桑椹胚或囊胚階段的胚胎進(jìn)行均等分割。將重組胚胎移入到受體子宮后，由于受體子宮不會(huì)對(duì)外來(lái)胚胎發(fā)生免疫排斥反應(yīng)，并能與之建立正常的生理和組織上的聯(lián)系，因此，重組胚胎能在受體子宮中繼續(xù)發(fā)育成轉(zhuǎn)基因克隆豬。

Ⅱ．⑴常用的滅菌方法有高壓蒸汽滅菌、灼燒滅菌和干熱滅菌。

⑵在稀釋土壤溶液的過(guò)程中每一步都要在酒精燈火焰旁進(jìn)行操作，防止雜菌污染；接種后的培養(yǎng)皿倒置于37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)皿倒置既可避免培養(yǎng)基中的水分過(guò)快地?fù)]發(fā)，又可防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染，恒溫為微生物的快速生長(zhǎng)提供溫度條件。

⑶含有酚紅指示劑的培養(yǎng)基從功能上劃分該培養(yǎng)基屬于鑒別培養(yǎng)基；尿素被分解產(chǎn)生的氨使pH升高，酚紅指示劑產(chǎn)生的顏色變化；變色區(qū)域越大，表明該菌株利用尿素的能力越強(qiáng)。