Question

如圖為轉(zhuǎn)基因煙草培育過程流程圖，請(qǐng)回答：
（l）攜帶外源基因的質(zhì)粒除了含有外源基因外，還包括

 

、

 

、復(fù)制原點(diǎn)和標(biāo)記基因中標(biāo)記基因的作用是

 

，構(gòu)建攜帶外源基因的質(zhì)粒時(shí)，需要使用的工具酶是

 

．
（2）圖中目的基因?qū)�人煙草�?xì)胞的方法是

 

，感染過程是利用農(nóng)桿菌中Ti質(zhì)粒上的

 

，使外源基因進(jìn)入并整合到煙草染色體DNA上．此外另一十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)的導(dǎo)人方法是

 

．
（3）將含有目的基因的受體細(xì)胞培養(yǎng)成煙草植株的技術(shù)叫做

 

，其理論基礎(chǔ)是

 

，圖中的生根、長(zhǎng)芽過程屬于

 

過程．
（4）在培養(yǎng)過程中，除添加必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還需要向培養(yǎng)基中添加

 

，同時(shí)除提供適宜的溫度、光照和氧氣等環(huán)境條件外，成功的另一關(guān)鍵是

 

．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù),植物組織培養(yǎng)的概念及原理

專題：

分析：基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答： 解：（l）基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等，其中標(biāo)記基因的作用是鑒別受體細(xì)胞中國(guó)是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)；構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，首先需用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，其次還需用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．
（2）由圖可知，將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法，其原理是：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞，并且整合到受體細(xì)胞染色體的DNA上．根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點(diǎn)，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細(xì)胞中染色體的DNA上．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的另一十分簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)的導(dǎo)人方法是花粉管通道法．
（3）將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞培養(yǎng)成轉(zhuǎn)基因植株還需采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，其理論基礎(chǔ)是植物細(xì)胞具有全能性．植物組織培養(yǎng)包括脫分化和再分化兩個(gè)重要的步驟，圖中的生根、長(zhǎng)芽過程屬于再分化過程．
（4）決定脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類及比例，因此在培養(yǎng)過程中，除添加必要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還需要向培養(yǎng)基中添加植物激素；植物組織培養(yǎng)時(shí)除提供適宜的溫度、光照和氧氣等環(huán)境條件外，成功的另一關(guān)鍵是無(wú)菌操作．
故答案為：
（1）啟動(dòng)子     終止子    鑒別受體細(xì)胞中國(guó)是否含有目的基因，從而將含有目的基因的細(xì)胞篩選出來(lái)     限制酶和DNA連接酶
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法     T-DNA    花粉管通道法
（3）植物組織培養(yǎng)      植物細(xì)胞具有全能性     再分化
（4）植物激素     無(wú)菌操作

點(diǎn)評(píng)：本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因煙草的培育過程圖解，考查基因工程和細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的原理及操作步驟，掌握各步驟中的相關(guān)細(xì)節(jié)；識(shí)記植物組織培養(yǎng)的過程、條件及原理等基礎(chǔ)知識(shí)，能結(jié)合所學(xué)的知識(shí)準(zhǔn)確答題．