Question

【題目】如圖表示血紅蛋白提取和分離實(shí)驗(yàn)的部分裝置或操作方法，請(qǐng)回答下列問題：

（1）為了提取和分離血紅蛋白，首先對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌以去除雜質(zhì)蛋白，洗滌時(shí)應(yīng)使用生理鹽水而不使用蒸餾水的原因是______________________________________________。

（2）如圖甲表示______________過程，該操作目的是去除樣品中______________的雜質(zhì)�，F(xiàn)有一定量的血紅蛋白溶液，進(jìn)行上述操作時(shí)若要盡快達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)效果，可以________________________（寫出一種方法）。一段時(shí)間后，若向燒杯中加入雙縮脲試劑，透析袋內(nèi)溶液是否出現(xiàn)紫色，請(qǐng)說明判斷的依據(jù): ______________________________________。

（3）如圖乙，往色譜柱中加樣的正確操作順序是______________（用序號(hào)表示）。在進(jìn)行④操作前，應(yīng)該等樣品____________________________，且要______________（填“打開”或“關(guān)閉”）下端出口。

（4）如圖丙，a、b均為蛋白質(zhì)分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是______，原因是______________________________________________。

Answer 1

【答案】防止紅細(xì)胞吸水漲破 透析（粗分離） 分子量較小 增加緩沖液的量 雙縮脲試劑與袋內(nèi)的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，會(huì)產(chǎn)生紫色物質(zhì) ②③④① 完全進(jìn)入凝膠層 關(guān)閉 a a相對(duì)分子質(zhì)量較大，無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快

【解析】

血紅蛋白提取和分離原理，蛋白質(zhì)的物理性質(zhì)：形狀、大小、電荷性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)、親和力等千差萬別，由此提取和分離各種蛋白質(zhì)。

凝膠色譜法原理：分子量大的分子通過多孔凝膠顆粒的間隙，路程短，流動(dòng)快；分子量小的分子穿過多孔凝膠顆粒內(nèi)部，路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。

（1）為了提取和分離血紅蛋白，首先對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行洗滌以去除雜質(zhì)蛋白，洗滌時(shí)應(yīng)使用生理鹽水而不使用蒸餾水的原因是生理鹽水保持紅細(xì)胞滲透壓的穩(wěn)定而不破碎，在未洗凈血漿中雜質(zhì)蛋白前，紅細(xì)胞如果破裂了，就可能使血紅蛋白和雜質(zhì)蛋白混在一起，加大了分離難度。

（2）圖甲表示血紅蛋白的透析過程，即血紅蛋白的粗分離，目的是去掉分子量較小的雜質(zhì)。進(jìn)行上述操作時(shí)若要盡快達(dá)到理想的實(shí)驗(yàn)效果，可以增加緩沖液的量。一段時(shí)間后，若向燒杯中加入雙縮脲試劑，雙縮脲試劑與袋內(nèi)的血紅蛋白發(fā)生反應(yīng)，會(huì)產(chǎn)生紫色物質(zhì)。

（3）如圖乙，往色譜柱中加樣的正確操作順序可依據(jù)樣品在色譜柱及凝膠層中的滲入量進(jìn)行分析，可以得出是②③④①。在進(jìn)行④操作前，應(yīng)該等樣品完全進(jìn)入凝膠層，且要關(guān)閉下端出口。

（4）如圖丙，a、b均為蛋白質(zhì)分子，a相對(duì)分子質(zhì)量較大，無法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在凝膠外部移動(dòng)，路程較短，移動(dòng)速度較快，所以a先從層析柱中洗脫出來。