Question

【題目】下圖是培育表達人乳鐵蛋白的乳腺生物反應(yīng)器的過程，圖中tetR表示四環(huán)素抗性基因，ampR表示氨芐青霉素抗性基因，BamHI、Bau3 A I、Bst I、HaeⅢ、Not I所指位點為限制酶的酶切位點，五種酶的識別序列及切割位點在下表中。據(jù)圖表回答

（1）若需在短時間內(nèi)獲得較多的外源基因，通常采用 技術(shù)。

（2）將雙鏈DNA在中性鹽溶液中加熱，兩條單鏈分開，叫做DNA 。處理后的DNA如果慢慢冷卻，又能恢復(fù)為雙鏈DNA，叫做 。大量的如右圖中N元素標記的DNA在變性后的退火過程中會形成

種DNA。

（3）若對圖中質(zhì)粒進行改造，插入的Not I酶切位點越多，質(zhì)粒的熱穩(wěn)定性越 。

（4）要將人乳蛋白基因插入載體，如果只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因，應(yīng)選擇的限制酶是 。

（5）為了獲取重組質(zhì)粒，將切割后的質(zhì)粒與目的基因片段混合，并加入 酶。

（6）篩選含有重組載體的大腸桿菌首先需要在含 的培養(yǎng)基上進行。

（7）將外源基因?qū)��?/span>受精卵常用的方法是 。將目的基因?qū)�入植物細胞常用的方法�?/span> 。

（8）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用 技術(shù)。

Answer 1

【答案】（1）PCR（2）變性 退火 1

（3）高 （4）Bau3A I （5）DNA連接

（6）氨芐青霉素 （7）顯微注射法 農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法（8）抗原——抗體雜交

【解析】（1）短時間獲得大量的外源基因，采用PCR技術(shù)

（2）將雙鏈DNA在中性鹽溶液中加熱，兩條單鏈分開，叫做DNA變性，處理后的DNA如果慢慢冷卻，又能恢復(fù)為雙鏈DNA，叫做退火。根據(jù)堿基互補配對原則，圖2中N元素標記的DNA在變性后的退火過程中只能形成1種DNA

（3）堿基之間的配對遵循堿基互補配對原則，即C-G，A-T，且C和G之間有3個氫鍵，A和T之間有2個氫鍵，因此C和G的含量越高，DNA分子熱穩(wěn)定性也越高．Not I酶切位點中均為C-G堿基對，因此插入的Not I酶切位點越多，質(zhì)粒中的C和G的含量就越高，其熱穩(wěn)定性也越高

（4）根據(jù)表中五種酶的識別序列及切割位點可知，限制酶Bau3AI還可以切割限制酶BstⅠ和限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將人乳蛋白基因插入載體，在只允許用一種限制酶酶切載體和人乳鐵蛋白基因的情況下，應(yīng)選擇限制酶Bau3AI

（5）質(zhì)粒與目的基因結(jié)合利用DNA連接酶

（6）用限制酶Bau3AI切割后會破壞四環(huán)素抗性基因，但不會破壞氨芐青霉素抗性基因，因此倒入重組質(zhì)粒的受體細胞可能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存下來

（7）將外源基因?qū)��?/span>受精卵常用的方法是顯微注射法，導(dǎo)入植物細胞的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法

（8）為檢測人乳鐵蛋白是否成功表達，可采用抗原——抗體雜交技術(shù)。