Question

【題目】回答有關(guān)基因工程的問題。

（1）構(gòu)建基因工程表達載體時，用不同類型的限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生_________末端。若要在限制酶切割目的基因和質(zhì)粒后使其直接進行連接，則應(yīng)選擇能使二者產(chǎn)生______________(填“相同”或“不同”)黏性末端的限制酶。

（2）利用大腸桿菌生產(chǎn)人胰島素時，構(gòu)建的表達載體含有人胰島素基因及其啟動子等，其中啟動子的作用是______________。在用表達載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌時，常用______________處理大腸桿菌，以利于表達載體進入；為了檢測胰島素基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可用標(biāo)記的胰島素基因片段作探針與mRNA雜交，該雜交技術(shù)稱為______________。為了檢測胰島素基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成______________，常用______________技術(shù)。

（3）如果要將某目的基因通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入植物細胞，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的______________中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的______________上。

（4）人的基因在細菌體內(nèi)能表達，說明人和細菌____________________________。

Answer 1

【答案】平 相同 提供RNA聚合酶特異性識別結(jié)合位點，驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA Ca2+(CaCl2溶液) 分子雜交技術(shù) 蛋白質(zhì)(成人胰島素) 抗原—抗體雜交 T—DNA 染色體 共用一套密碼子

【解析】

基因工程操作的工具是限制性內(nèi)切酶、DNA連接酶和運載體；基因工程操作的步驟為提取目的基因、目的基因與運載體結(jié)合、將目的基因?qū)�入受體細胞、目的基因的檢測與表達。目的基因的檢測有多種手段，如①DNA分子雜交技術(shù)；②分子雜交技術(shù)；③抗原-抗體雜交技術(shù)。

（1）用限制酶切割DNA后，可能產(chǎn)生黏性末端，也可能產(chǎn)生平口末端．若要在限制酶基因工程中，往往采用同種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒以產(chǎn)生相同的黏性末端，再用DNA連接酶使其直接進行連接。

（2）啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的位點，有了它才能驅(qū)動基因轉(zhuǎn)錄出mRNA，最終獲得所需要的蛋白質(zhì)；將目的基因?qū)�入微生物細胞時，常用Ca2+處理微生物細胞，使其成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞，以利于表達載體進入；為了檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，可采用分子雜交技術(shù)，即用放射性同位素標(biāo)記的胰島素基因作探針與mRNA雜交；了檢測目的基因轉(zhuǎn)錄的mRNA是否翻譯成蛋白質(zhì)，可采抗原--抗體雜交技術(shù)。

（3）采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)�入植物細胞時，先要將目的基因插入農(nóng)桿菌Ti質(zhì)粒的T-DNA中，然后用該農(nóng)桿菌感染植物細胞，通過DNA重組將目的基因插入植物細胞的染色體上。

（4）人的基因在細菌體內(nèi)能表達，說明人和細菌共用一套密碼子。