Question

乙醇等“綠色能源”的開發(fā)備受世界關(guān)注．利用玉米秸桿生產(chǎn)燃料酒精的大致流程為：

（1）玉米秸桿經(jīng)預(yù)處理后，應(yīng)該選用纖維素酶進(jìn)行水解，使之轉(zhuǎn)化為發(fā)酵所需的葡萄糖．從以下哪些微生物中可以提取上述水解過(guò)程所需的酶

 

A．釀制果醋的醋酸菌 B．生長(zhǎng)在腐木上的霉菌 C．制作酸奶的乳酸菌 D．生產(chǎn)味精的谷氨酸棒狀桿菌
（2）在生產(chǎn)糖液的過(guò)程中，為了使酶能夠被反復(fù)利用，可采用

 

技術(shù)．
（3）從野生酵母群中分離純化酵母菌，最常使用的接種方法是

 

和

 

兩種．
（4）對(duì)野生酵母菌進(jìn)行誘變可篩選出具有耐高糖和耐酸性的高產(chǎn)突變菌株，利用PCR技術(shù)可大量獲得突變菌所攜帶的特殊基因．在PCR擴(kuò)增反應(yīng)中加入引物的作用是

 

．
（5）研究者設(shè)計(jì)從某種真菌中獲取纖維素酶基因并轉(zhuǎn)入酵母菌，獲得可直接利用纖維素生產(chǎn)酒精的酵母工程菌．在此過(guò)程中，將纖維素酶基因切割下來(lái)所用的工具是

 

，用

 

將纖維素酶基因與載體拼接成新的DNA分子，下一步將該DNA分子

 

，以完成工程菌的構(gòu)建．

Answer 1

考點(diǎn)：制備和應(yīng)用固相化酶,微生物的分離和培養(yǎng),基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、制備固定化酵母的步驟為酵母細(xì)胞的活化→配制CaCl₂溶液→配制海藻酸鈉溶液→海藻酸鈉溶液與酵母細(xì)胞混合→固定化酵母菌細(xì)胞，其中活化是讓處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)；
2、常用的接種方法有平板劃線法和稀釋涂布平板法，平板劃線分離法的過(guò)程是：由接種環(huán)以菌操作沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開來(lái)，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落．

解答： 解：（1）玉米秸桿經(jīng)預(yù)處理后，應(yīng)該選用纖維素酶進(jìn)行水解，使之轉(zhuǎn)化為發(fā)酵所需的葡萄糖．由于纖維素分解酶存在于分解纖維素的微生物中，故應(yīng)從富含纖維素的環(huán)境中去尋找纖維素分解菌，則應(yīng)從生長(zhǎng)在腐木上的霉菌中提取．
（2）固定化酶（固定化細(xì)胞）技術(shù)可使酶反復(fù)使用，故在生產(chǎn)糖液的過(guò)程中，為了使酶能夠被反復(fù)利用，可采用固定化酶（固定化細(xì)胞）技術(shù)．
（3）從野生酵母群中分離純化酵母菌，最常使用的接種方法是平板劃線法和稀釋涂布分離法．
（4）由于DNA不能從頭開始合成，故在PCR擴(kuò)增反應(yīng)中加入引物的作用是結(jié)合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位點(diǎn)（作為聚合酶作用的起點(diǎn)）．
（5）基因工程過(guò)程中，將纖維素酶基因切割下來(lái)所用的工具是限制性核酸內(nèi)切酶，用DNA連接酶將纖維素酶基因與載體拼接成新的重組DNA分子，下一步將該DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞（酵母菌），以完成工程菌的構(gòu)建．．
故答案為：
（1）B       
（2）固定化酶（固定化細(xì)胞）
（3）劃線分離法     涂布分離法（平板劃線法和稀釋涂布分離法）
（4）結(jié)合在模板DNA上，提供DNA延伸起始位點(diǎn)（作為聚合酶作用的起點(diǎn)）
（5）限制酶（限制性核酸內(nèi)切酶）   DNA連接酶   導(dǎo)入受體細(xì)胞（酵母菌）

點(diǎn)評(píng)：本題考查了酶的固定化、微生物培養(yǎng)、纖維素分解菌的分離和基因工程，意在考查考生識(shí)記所列知識(shí)點(diǎn)的能力和分析應(yīng)用能力，試題難度一般．