Question

19．利用轉(zhuǎn)基因山羊乳腺生物反應(yīng)器可生產(chǎn)人促紅細(xì)胞生成素（EPO），獲得轉(zhuǎn)基因山羊的過程如下圖．請據(jù)圖回答下列問題：

（1）在已知EPO基因的上游和下游堿基序列的前提下，過程①獲取目的基因的方法為PCR擴(kuò)增．
（2）在過程②中，應(yīng)用同一種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，使其具有相同的黏性末端．EPO基因表達(dá)載體上要具備啟動子和終止子等調(diào)控元件，以便完成EPO基因的轉(zhuǎn)錄．
（3）在過程③中，用顯微注射法法將EPO表達(dá)載體移入雄原核中．在過程⑤前，需對囊胚期的細(xì)胞進(jìn)行鑒定：一是用抗原-抗體雜交法鑒定EPO基因表達(dá)產(chǎn)物；二是用DNA分析法鑒定囊胚的性別，選用雌性胚胎．
（4）為獲得更多轉(zhuǎn)基因山羊，一方面可對供體母山羊注射促性腺激素促進(jìn)超數(shù)排卵．
另一方面，可對早期胚胎進(jìn)行分割移植，胚胎分割的關(guān)鍵是將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均分．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示是獲得轉(zhuǎn)基因山羊的過程圖，其中①表示獲取目的基因的過程；②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；③表示將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程；④表示早期胚胎培養(yǎng)過程；⑤表示胚胎移植過程．

解答 解：（1）利用PCR技術(shù)獲取目的基因的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序列．因此，在已知EPO基因的上游和下游堿基序列的前提下，可以合成一對引物，此時宜采用PCR技術(shù)獲取目的基因．
（2）②表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程，該過程中首先要用同一種限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和運(yùn)載體，以便產(chǎn)生相同的黏性末端，其次用DNA連接酶將目的基因和運(yùn)載體連接形成重組DNA分子．基因表達(dá)載體的組成包括啟動子、目的基因、標(biāo)記基因和終止，其中啟動子是RNA聚合酶的結(jié)合位點，終止子是轉(zhuǎn)錄終止的部位，因此EPO基因上要具備啟動子和終止子等調(diào)控元件，以便完成EPO基因的轉(zhuǎn)錄．
（3）③是將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞的過程，若受體細(xì)胞是動物細(xì)胞，則采用顯微注射法．基因表達(dá)產(chǎn)物是蛋白質(zhì)，因此要鑒定EPO基因表達(dá)產(chǎn)物可采用抗原-抗體雜交法；鑒定囊胚的性別可取滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行DNA分析．
（4）為獲得更多轉(zhuǎn)基因山羊，一方面可對供體母山羊注射促性腺激素促進(jìn)超數(shù)排卵．另一方面，可對早期胚胎進(jìn)行分割移植，胚胎分割的關(guān)鍵是將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均分，否則會影響分割后胚胎的恢復(fù)和進(jìn)一步發(fā)育．
故答案為：
（1）PCR擴(kuò)增
（2）同一種限制酶    啟動子和終止子
（3）顯微注射法    抗原-抗體雜交     DNA分析
（4）促性腺激素   將內(nèi)細(xì)胞團(tuán)均分

點評 本題結(jié)合轉(zhuǎn)基因山羊的培育過程圖，考查基因工程和胚胎工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細(xì)節(jié)；識記胚胎分割的特點及相關(guān)應(yīng)用，能結(jié)合圖中信息準(zhǔn)確答題，屬于考綱識記和理解層次的考查．