Question

回答有關(guān)生物技術(shù)的問題．
Ⅰ、抗體的制備經(jīng)歷了細(xì)胞學(xué)層面和分子學(xué)層面兩種合成途徑的研究．如圖是生物學(xué)技術(shù)制備抗體的兩個(gè)途徑模式簡圖1．

（1）在獲取抗體之前，需要向健康人體注射特定抗原（如乙肝疫苗），并且每隔一周重復(fù)注射一次．免疫學(xué)細(xì)胞A在人體主要介導(dǎo)

 

免疫．
（2）過程①至②抗體的獲取稱為

 

，其中①是

 

過程．
Ⅱ、圖1中，結(jié)構(gòu)甲的建構(gòu)可用圖2和3表示．圖2表示含有目的基因的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖3表示一種質(zhì)粒的結(jié)構(gòu)和部分堿基序列．現(xiàn)有4種限制性核酸內(nèi)切酶，它們識別的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為下表所示．

限制酶	MspⅠ	BamHⅠ	MboⅠ	SmaⅠ
識別序列及切割位點(diǎn)

（3）若用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長度為

 

．
（4）若圖2中虛線方框內(nèi)的堿基對被T-A堿基對替換，那么基因D就突變?yōu)榛�因d．從雜合子中分離出圖1及對應(yīng)的DNA片段，用限制酶SmaⅠ完全切割，產(chǎn)物中共有

 

種不同長度的DNA片段．
（5）若將圖3中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理后進(jìn)行拼接，形成重組質(zhì)粒，那么應(yīng)選用的限制酶是

 

．在導(dǎo)入重組質(zhì)粒后，為了篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌，一般需要添加

 

的

 

（固體/液體）培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)．在培養(yǎng)前，培養(yǎng)基必須先經(jīng)過滅菌，所用的方法是

 

；采用

 

的方法接種以獲得單菌落后繼續(xù)篩選．

Answer 1

考點(diǎn)：單克隆抗體的制備過程,基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：分析圖1，細(xì)胞A表示效應(yīng)B細(xì)胞，細(xì)胞Y表示雜交瘤細(xì)胞，①過程表示動物細(xì)胞融合，②過程動物細(xì)胞培養(yǎng)，③過程提取信使RNA，④過程表示逆轉(zhuǎn)錄，⑤表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，⑥表示導(dǎo)入受體細(xì)胞．
分析圖2，DNA片段含有兩個(gè)SmaⅠ識別位點(diǎn)，第一個(gè)識別位點(diǎn)在左端534bp序列向右三個(gè)堿基對的位置；第二個(gè)識別位點(diǎn)在右端658bp序列向左三個(gè)堿基的位置．
分析圖3，若使用MboI會同時(shí)破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamHI來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的受體細(xì)胞．

解答： 解：（1）向健康人體注射特定抗原，提取出A漿細(xì)胞（效應(yīng)B淋巴細(xì)胞），在人體參與體液免疫．
（2）過程①至②抗體的獲取稱為單克隆抗體，其中①是細(xì)胞融合過程，Y細(xì)胞稱為雜交瘤細(xì)胞．
（3）SmaⅠ識別的序列為GGGCCC，切割會產(chǎn)生平末端；圖1中DNA片段含有兩個(gè)SmaⅠ識別位點(diǎn)，第一個(gè)識別位點(diǎn)在左端534 bp序列向右三個(gè)堿基對的位置；第二個(gè)識別位點(diǎn)在右端658bp序列向左三個(gè)堿基的位置，從而兩個(gè)位點(diǎn)切割后產(chǎn)生的DNA片段的長度分布為534+3，796-3-3，658+3，即得到的DNA片段長度為537、790、661．
（4）在雜合子體內(nèi)含有基因D和基因d，基因D的序列中含有兩個(gè)識別位點(diǎn)，經(jīng)過SmaI完全切割會產(chǎn)生537bp、790bp和661bp三種不同長度的片段，基因d的序列中含有一個(gè)識別位點(diǎn)，經(jīng)過切割后會產(chǎn)生1327bp和661bp兩種長度的片段，綜上，雜合子中分離到該基因的DNA片段經(jīng)過切割后會產(chǎn)生4種不同長度的片段．
（5）能夠獲取目的基因并切開質(zhì)粒的限制酶有識別序列為GGATCC的BamH I和識別序列為GATC的MboI，若使用Mbo I會同時(shí)破壞質(zhì)粒中的抗生素A抗性基因和抗生素B抗性基因，所以要用BamH I來切割目的基因和質(zhì)粒，切割后保留了完整的抗生素B抗性基因，便于篩選出含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌．因?yàn)槟康幕�因和運(yùn)載體是用同種限制酶切割的，目的基因兩端的末端和質(zhì)粒切割后的兩個(gè)末端都能進(jìn)行互補(bǔ)，可能出現(xiàn)目的基因反向連接在運(yùn)載體上的情況，導(dǎo)致基因D不能正確表達(dá)．在培養(yǎng)前，培養(yǎng)基常用高壓蒸汽滅菌；采用劃線（或涂布）的方法接種以獲得單菌落后繼續(xù)篩選．
故答案為：
（1）體液  
（2）單克隆抗體       細(xì)胞融合 
（3）537、790、661
（4）4
（5）BamHⅠ抗生素B      固體      高壓蒸汽滅菌      平板劃線（或涂布）

點(diǎn)評：本題考查單克隆抗體的制備、基因工程、微生物的培養(yǎng)等相關(guān)知識，意在考查學(xué)生識圖能力、信息的提取與應(yīng)用能力、通過比較與綜合做出合理判斷的能力等．