Question

16．下面表示科學家培育耐寒生物的過程，請回答：
cDNA文庫$\stackrel{獲取}{→}$抗凍蛋白基因$\stackrel{①}{→}$更多抗凍蛋白基因$\stackrel{構建}{→}$②$\stackrel{導入}{→}$受體細胞→耐寒生物
（1）從cDNA文庫中獲取的目的基因無（有/無）啟動子．實現(xiàn)①過程常用PCR技術擴增．該技術的原理是DNA的雙鏈復制．在PCR反應體系中應含有擴增緩沖液、4種原料、模板DNA、引物及熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）．
（2）②表示基因表達載體，其中標記基因的作用是鑒別受體細胞中是否含有目的基因．
（3）若要培育抗凍能力強的轉(zhuǎn)基因羊，可將魚的抗凍蛋白基因?qū)�入羊的受精卵中，該過程常用的方法是顯微注射法，培育該轉(zhuǎn)基因羊的最后一道“工序”是胚胎工程的胚胎移植技術．

Answer 1

分析 基因工程技術的基本步驟：
（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲取、利用PCR技術擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補DNA片段，與載體連接后儲存在一個受體菌群中，這個受體菌群就叫這種生物的cDNA文庫，由于啟動子不能轉(zhuǎn)錄，因此逆轉(zhuǎn)錄形成的cDNA中沒有啟動子；PCR的原理是DNA的雙鏈復制；PCR是在較高溫度下進行的，因此需要熱穩(wěn)定DNA聚合酶．
（2）②表示基因表達載體，其中標記基因的作用是為了鑒別受體細胞中是否含有目的基因．
（3）培育轉(zhuǎn)基因動物時，常以受精卵作為受體細胞，因為受精卵的全能性最高；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；培育該轉(zhuǎn)基因動物的最后一道“工序”是胚胎移植．
故答案為：
（1）無       DNA的雙鏈復制    熱穩(wěn)定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶）
（2）基因表達載體    鑒別受體細胞中是否含有目的基因
（3）受精卵   顯微注射法    胚胎移植

點評 本題結合圖解，考查基因工程的相關知識，要求考生識記基因工程的原理及操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結合所學的知識準確答題．