Question

12．基因工程的設(shè)計和操作中，啟動子是運載體的重要組成部分．如圖是一種克隆啟動子的辦法，請據(jù)圖分析回答：

（1）啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位．若要獲得啟動子的堿基序列不能依據(jù)基因表達產(chǎn)物推知，原因是基因中啟動子的堿基序列不能被轉(zhuǎn)錄．
（2）過程①、③分別使用的限制酶是BamHⅠHindⅢ．
（3）過程④的原理是DNA雙鏈復(fù)制，需要用到的工具酶是Taq酶等熱穩(wěn)定聚合酶．
（4）過程⑤中克隆的啟動子與外源基因連接時，根據(jù)外源基因的核苷酸序列設(shè)計引物a．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位．基因中啟動子的堿基序列不能被轉(zhuǎn)錄，因此要獲得啟動子的堿基序列不能依據(jù)基因表達產(chǎn)物推知．
（2）根據(jù)過程①后的結(jié)果可知，該過程使用的限制酶是BamHⅠ；根據(jù)過程③的結(jié)果可知，該過程使用的限制酶是HindⅢ．
（3）過程④采用PCR技術(shù)進行擴增，其原理是DNA雙鏈復(fù)制；PCR操作是在較高溫度下進行的，因此需要用到的工具酶是Taq酶等熱穩(wěn)定聚合酶．
（4）PCR技術(shù)的前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物．因此，過程⑤中克隆的啟動子與外源基因連接時，根據(jù)外源基因的核苷酸序列設(shè)計引物a．
故答案為：
（1）RNA聚合酶     基因中啟動子的堿基序列不能被轉(zhuǎn)錄
（2）BamHⅠHindⅢ
（3）DNA雙鏈復(fù)制     Taq酶等熱穩(wěn)定聚合酶
（4）外源基因的核苷酸序列

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合圖中信息準確答題．