Question

【題目】微生物產(chǎn)生的脲酶能夠特異性分解尿素，在農(nóng)業(yè)、食品加工業(yè)和污水處理中用途廣泛。例如飲料酒在生產(chǎn)過程中會(huì)產(chǎn)生少量尿素，酒體呈酸性，廠家常用脲酶分解酒體中的尿素以改善飲料酒的品質(zhì)，請(qǐng)回答下列問題：

（1）從土壤中篩選產(chǎn)脲酶菌時(shí)，所配制的培養(yǎng)基以____________為唯一氮源，與固體培養(yǎng)基相比，液體培養(yǎng)基更適于富集培養(yǎng)的原因是________________________。

（2）在微生物培養(yǎng)過程中，獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是____________。復(fù)篩酸性脲酶菌的培養(yǎng)基為中性固體培養(yǎng)基，以酚紅為指示劑，在涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌液量不宜過多的原因是__________，在挑選時(shí)，應(yīng)選擇____________（選填“有紅色圈的菌落”或“無(wú)紅色圈的菌落”）。

（3）在純化該菌時(shí)，為了得到單菌落，常用的接種方法有____________，為了進(jìn)行計(jì)數(shù)，某同學(xué)吸取菌液lmL稀釋1000倍，然后吸取稀釋后的菌液0．2mL，接種于固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。一段時(shí)間后觀察菌落并計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，得到三個(gè)培養(yǎng)皿中菌落數(shù)分別是78、88、74，則該菌的濃度是____________個(gè)細(xì)菌/mL。若需較長(zhǎng)時(shí)間保存該菌種，可用的方法是____________。

Answer 1

【答案】尿素 培養(yǎng)基與菌體充分接觸，菌體繁殖快 防止外來(lái)雜菌的入侵 菌液過多會(huì)使培養(yǎng)基表面的菌懸液出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，影響分離效果 無(wú)紅色圈的菌落 平板劃線法和稀釋涂布平板法 4×105 甘油管藏法

【解析】

實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選
①原理：人為提供有利于目的菌株生長(zhǎng)的條件（包括營(yíng)養(yǎng)、溫度。pH等），同時(shí)抑制或阻止其他微生物生長(zhǎng)。培養(yǎng)基選擇分解尿素的微生物的原理：培養(yǎng)基的氮源為尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作為氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生長(zhǎng)發(fā)育繁殖，而受到抑制，所以用此培養(yǎng)基就能夠選擇出分解尿素的微生物
②方法：能合成脲酶的細(xì)菌才能分解尿素。配制以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基，能夠生長(zhǎng)的細(xì)菌就是能分解尿素的細(xì)菌。

（1）根據(jù)分析可知，要從土壤中篩選產(chǎn)脲酶菌時(shí)，在配制的培養(yǎng)基時(shí)需要以尿素為唯一氮源，從而達(dá)到篩選尿素分解菌的目的，與固體培養(yǎng)基相比，液體培養(yǎng)基能使菌體與營(yíng)養(yǎng)充分接觸，從而能更充分的獲取營(yíng)養(yǎng)，進(jìn)而有利于菌體繁殖，所以液體培養(yǎng)基更適于富集培養(yǎng)。
（2）涂布平板時(shí)，滴加到培養(yǎng)基表面的菌液量不宜過多，否則會(huì)使培養(yǎng)基表面的菌懸液出現(xiàn)積液，導(dǎo)致菌體堆積，無(wú)法達(dá)到分離效果，在挑選目標(biāo)菌種時(shí)，由于目的菌不能是酚紅指示劑變紅，因此應(yīng)選擇無(wú)紅色圈的菌落。
（3）在純化該菌時(shí)，為了得到單菌落，可用平板劃線法和稀釋涂布平板法進(jìn)行接種，為了進(jìn)行計(jì)數(shù)，某同學(xué)吸取菌液lmL稀釋1000倍，然后吸取稀釋后的菌液0．2mL，接種于固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)。一段時(shí)間后觀察菌落并計(jì)數(shù)，實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，得到三個(gè)培養(yǎng)皿中菌落數(shù)分別是78、88、74，則該菌的濃度為（78+88+84）÷3÷0.2×1000=4×105個(gè)細(xì)菌/mL。若較長(zhǎng)時(shí)間保存該菌種，通常用甘油管藏法保存。