Question

【題目】[生物——選修3:現(xiàn)代生物科技專題]

近幾十年來(lái)，植物基因工程取得相當(dāng)大的進(jìn)展，科學(xué)家將藥用蛋白轉(zhuǎn)向植物生產(chǎn)，研究出了用轉(zhuǎn)基因馬鈴薯生產(chǎn)人的血清白蛋白的方法。下圖表示EcoR Ⅰ、BamH Ⅰ兩種限制酶在質(zhì)粒上的切割位點(diǎn)，兩種酶識(shí)別和切割位點(diǎn)見(jiàn)下表�；卮鹣铝邢嚓P(guān)問(wèn)題。

（1）該工程中適宜用來(lái)切割質(zhì)粒的限制酶是______________，原因是________________________。

（2）獲取血清白蛋白基因可以利用反轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建的______________文庫(kù)中獲取，若利用PCR技術(shù)擴(kuò)增血清蛋白基因，設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是______________，還需要在引物的一端加上_________序列，以便于后續(xù)的剪切和連接。

（3）將目的基因和質(zhì)粒進(jìn)行連接后，需先用____________處理農(nóng)桿菌以便將基因表達(dá)載體導(dǎo)入馬鈴薯細(xì)胞，篩選含有目的基因的細(xì)胞需在培養(yǎng)基中添加________________________。

（4）從含有血清白蛋白基因的馬鈴薯細(xì)胞中提取血清白蛋白，需通過(guò)____________過(guò)程培養(yǎng)到愈傷組織，從其中提取。

Answer 1

【答案】 BamH Ⅰ 用EcoR Ⅰ切割會(huì)將質(zhì)粒上的兩個(gè)抗性基因都破壞 cDNA 干擾素基因兩端的部分核苷酸序列 GGATCC Ca2+（ 氨芐青霉素 脫分化

【解析】試題分析：據(jù)圖分析，質(zhì)粒上有EcoRⅠ、BamHⅠ兩種限制酶的切割位點(diǎn)，還含有抗四環(huán)素基因和抗氨芐青霉素基因兩種標(biāo)記基因，若用EcoRⅠ酶切割會(huì)破壞兩種標(biāo)記基因，而用BamHⅠ酶切割會(huì)破壞抗四環(huán)素基因，但是不會(huì)破壞抗氨芐青霉素基因。

（1）根據(jù)以上分析可知，用EcoRⅠ切割會(huì)將質(zhì)粒上的兩個(gè)抗性基因都破壞，所以只能用BamHⅠ切割質(zhì)粒。

（2）利用反轉(zhuǎn)錄法構(gòu)建的是部分基因文庫(kù)，即cDNA。利用PCR技術(shù)擴(kuò)增血清蛋白基因的過(guò)程中，設(shè)計(jì)引物序列的主要依據(jù)是干擾素基因兩端的部分核苷酸序列，由于使用的限制酶是BamHⅠ，所以根據(jù)表格中的限制酶的識(shí)別序列，還需要在引物的一端加上GGATCC序列，以便于后續(xù)的剪切和連接。

（3）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌時(shí)，需要先用鈣離子處理，使農(nóng)桿菌處于感受態(tài)太，便于重組質(zhì)粒的導(dǎo)入。由于用BamHⅠ酶切割會(huì)破壞抗四環(huán)素基因，但是沒(méi)有破壞抗氨芐青霉素基因，所以篩選含有目的基因的細(xì)胞需在培養(yǎng)基中添加氨芐青霉素。

（4）愈傷組織是馬鈴薯細(xì)胞經(jīng)過(guò)脫分化形成的。