Question

【題目】回答下列關(guān)于植物組織培養(yǎng)的問題。

（1）植物組織培養(yǎng)和微生物培養(yǎng)都會用到超凈臺，超凈臺的工作原理是：在特定的空間內(nèi)，室內(nèi)空氣通過特殊裝置___________，吹出的潔凈氣流可以排出工作室原來的空氣，將塵埃顆粒和生物顆粒帶走，形成__________的工作環(huán)境。在此操作過程中，同時需打開_________，持續(xù)30分鐘以上。

（2）利用MS培養(yǎng)基配置成發(fā)芽培養(yǎng)基時，除了加相應(yīng)量的BA溶液、NAA溶液，蔗糖外，還需要加一定量的_________，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后備用。影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有溫度、壓力、________等因素。

（3）若使用自然生長的菊花莖段，進行菊花的組織培養(yǎng)，需用70%乙醇和__________對莖段進行消毒；若莖段取自經(jīng)_________培養(yǎng)的菊花幼苗，則不需進行消毒直接插入生芽培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。發(fā)芽培養(yǎng)時__________（需要/不需要）光照條件。

Answer 1

【答案】過濾 無菌 紫外燈 瓊脂 時間（其他合理答案也得分） 5%次氯酸鈉 無菌 需要

【解析】

1、植物組織培養(yǎng)的注意事項：

（1）接種時應(yīng)注意的事項：①接種室要消毒；②無菌操作；③接種時要防止交叉污染；④接種完立刻蓋好瓶口。

（2）外植體接種前，需要將接種室、接種箱滅菌和對外植體消毒的操作：

①接種前一天，將接種室的四個角落用甲醛溶液和高錳酸鉀熏蒸。

②接種前1小時，在接種室內(nèi)用噴霧器噴灑來蘇水；桌椅也用來蘇水擦拭；接種箱內(nèi)用甲醛溶液和高錳酸鉀熏蒸。

③將滅菌室和接種箱內(nèi)用紫外燈滅菌。

④接種前，操作者用肥皂清洗雙手，擦干，再用酒精棉球擦拭雙手。

⑤用次氯酸鈉溶液將外植體消毒。

2、在離體的植物器官、組織或細胞脫分化形成愈傷組織的過程中，需要的條件：①消毒滅菌；②一定濃度的植物激素；③適宜的溫度；④充足的養(yǎng)料。

3、影響植物組織培養(yǎng)的因素：①培養(yǎng)基配制；②外植體選取；③激素的運用；④消毒；⑤溫度、pH、光照。

4、植物組織培養(yǎng)中植物激素使用：物組織培養(yǎng)中關(guān)鍵性激素是生長素和細胞分裂素；同時使用生長素和細胞分裂素時，兩者用量的比例影響植物細胞的發(fā)育方向。

5、實驗室常用的消毒方法：煮沸消毒；化學(xué)藥物消毒；紫外線消毒。

6、實驗室常用的滅菌方法：

①灼燒滅菌：將微生物的接種工具，如接種環(huán)、接種針或其他金屬工具，直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌，此外，在接種過程中，試管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通過火焰燃燒來滅菌；

②干熱滅菌：能耐高溫的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培養(yǎng)皿）和金屬用具等，可以采用這種方法滅菌；

③高壓蒸汽滅菌：將滅菌物品放置在盛有適量水的高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，為達到良好的滅菌效果，一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。

（1）超凈臺的工作原理是：在特定的空間內(nèi)，室內(nèi)空氣通過特殊裝置過濾吹出的潔凈氣流可以排出工作室原來的空氣，將塵埃顆粒和生物顆粒帶走，形成無菌的工作環(huán)境。在此操作過程中，同時需打開紫外燈，持續(xù)30分鐘以上。

（2）利用MS培養(yǎng)基配置成的發(fā)芽培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，因此除了加相應(yīng)量的BA溶液、NAA溶液、蔗糖外，還需要加一定量的瓊脂，經(jīng)高壓蒸汽滅菌后備用。高壓蒸汽滅菌一般在壓力為100kPa，溫度為121℃的條件下，維持15～30min。因此影響高壓蒸汽滅菌效果的因素有溫度、壓力、時間等因素。

（3）進行菊花的組織培養(yǎng)，需要對外植體進行消毒處理，用70%乙醇和5%次氯酸鈉對莖段進行消毒；若莖段取自經(jīng)無菌培養(yǎng)的菊花幼苗，則不需進行消毒直接插入生芽培養(yǎng)基進行培養(yǎng)。發(fā)芽培養(yǎng)時需要在光照條件下培養(yǎng)，以便于葉綠素的合成。