Question

【題目】回答下列（一）、（二）小題：

（一）請回答與微生物培養(yǎng)和植物組織培養(yǎng)有關(guān)的問題：

（1）高壓蒸汽滅菌是常見的無菌操作。在對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時，發(fā)現(xiàn)滅菌鍋內(nèi)壓力達(dá)到1kg/cm2而溫度未達(dá)到121℃，為同時達(dá)到設(shè)定的溫度和壓力要求，此時應(yīng)該___________（填操作過程）。利用果酒制作果醋時，___________（填“能”或者“不能”）對果酒進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。

（2）制作泡菜時，蔬菜入壇前在開水中浸1 min和壇內(nèi)加入一些___________以減少發(fā)酵時間。測定泡菜汁樣品液亞硝酸鹽的含量時，如果錯將光照波長550nm變成450nm，OD值會變___________。

（3）在超凈臺內(nèi)接種目標(biāo)菌種時，紫外燈應(yīng)該關(guān)閉，這是因為___________（至少寫出兩點）。

（4）在配制MS培養(yǎng)基時，常先配成母液后用時稀釋，這樣做的優(yōu)點是___________。在對菊花莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)時，一般先選用___________培養(yǎng)基。

（二）回答與基因工程和植物克隆有關(guān)的問題：

科研工作者將TaNHX2基因轉(zhuǎn)移到某植物細(xì)胞內(nèi)，獲得了轉(zhuǎn)基因耐鹽植株新品種。下圖是獲取的含有目的基因的DNA片斷，Sau3AⅠ、 EcoRⅠ、 BamhⅠ三種限制性核酸內(nèi)切酶的識別序列分別是↓GATC、G↓AATTC、G↓GATCC，質(zhì)粒上各有一個Sau3AⅠ和 ECoRⅠ的酶切位點。請分析回答問題：

（1）若用BamH Ⅰ切割圖中所示的DNA片段獲得了目的基因，則需選用___________酶切割質(zhì)粒，以便構(gòu)建重組質(zhì)粒，該方案的缺陷是會出現(xiàn)目的基因和質(zhì)粒的自我環(huán)化以及___________。故切割圖中所示DNA片段的最佳方案是選用___________酶。實驗中酶作用的強(qiáng)弱可用___________表示。

（2）將獲得的重組質(zhì)粒導(dǎo)入原生質(zhì)體，導(dǎo)入方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和___________。原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇，其作用是___________。原生質(zhì)體經(jīng)過細(xì)胞壁再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成___________。

（3）為了從個體水平檢測成果，需要進(jìn)行的操作是___________。

Answer 1

【答案】將鍋內(nèi)氣體放盡后重新加熱 不能 腌制過的泡菜汁 小 可以防止因紫外線照射引起菌種變異，又可以避免紫外線對人體的傷害 在配制培養(yǎng)基時可以減小加入微量物質(zhì)時出現(xiàn)的誤差 生芽（發(fā)芽） Sau3AI 目的基因在質(zhì)粒上的連接方向不確定 EcoRI和 BamHI 酶活性 顯微注射法 維持一定的滲透壓，保持原生質(zhì)體的形態(tài) 愈傷組織 將轉(zhuǎn)基因植株種植在鹽堿地，觀察其生長狀況

【解析】

消毒和滅菌

	消毒	滅菌
概念	使用較為溫和的物理或化學(xué)方法殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物（不包芽孢和孢子）	使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所用的微生物（包括芽孢和孢子）
常用方法	煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法	灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌
適用對象	操作空間、某些液體、雙手等	接種環(huán)、接種針、玻璃器皿、培養(yǎng)基等

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

（一）（1）在對培養(yǎng)基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌時，發(fā)現(xiàn)滅菌鍋內(nèi)壓力達(dá)到1kg/cm2而溫度未達(dá)到121℃，為同時達(dá)到設(shè)定的溫度和壓力要求，此時應(yīng)該將鍋內(nèi)氣體放盡后重新加熱。利用果酒制作果醋時，不能對果酒進(jìn)行高壓蒸汽滅菌，否則會殺死菌種。

（2）泡菜汁中含有已經(jīng)擴(kuò)增的一定量的發(fā)酵菌種，所以在制作泡菜時，蔬菜入壇前在開水中浸1min和壇內(nèi)加入一些腌制過的泡菜汁以減少發(fā)酵時間。測定泡菜汁樣品液亞硝酸鹽的含量時，如果錯將光照波長550nm變成450nm，OD值會變小。

（3）在超凈臺內(nèi)接種目標(biāo)菌種時，紫外燈應(yīng)該關(guān)閉，這是因為可以防止因紫外線照射引起菌種變異，又可以避免紫外線對人體的傷害。

（4）在配制MS培養(yǎng)基時，常先配成母液后用時稀釋，這樣在配制培養(yǎng)基時可以減小加入微量物質(zhì)時出現(xiàn)的誤差；在對菊花莖段進(jìn)行組織培養(yǎng)時，一般先選用生芽（發(fā)芽）培養(yǎng)基。

（二）（1）根據(jù)各種限制酶的識別序列及切割位點可知，限制酶BamHⅠ切割形成的黏性末端與限制酶Sau3AI切割形成的黏性末端相同，因此若用BamHⅠ切割圖中所示的DNA片段獲得了目的基因，則需選用Sau3AI酶切割質(zhì)粒，以便構(gòu)建重組質(zhì)粒；

用一種酶切割目的基因或質(zhì)粒，導(dǎo)致目的基因或質(zhì)粒兩端的黏性末端相同，這樣會出現(xiàn)目的基因和質(zhì)粒的自我環(huán)化以及目的基因在質(zhì)粒上的連接方向不確定；因此，切割質(zhì)粒應(yīng)該用Sau3AⅠ和EcoRⅠ酶，而切割圖中DNA片段需要用EcoRI和BamHI酶；實驗中酶作用的強(qiáng)弱可用酶活性表示。

（2）將獲得的重組質(zhì)粒導(dǎo)入原生質(zhì)體，導(dǎo)入方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法和顯微注射法；原生質(zhì)體培養(yǎng)液中需要加入適宜濃度的甘露醇，其作用是維持一定的滲透壓，保持原生質(zhì)體的形態(tài)；原生質(zhì)體經(jīng)過細(xì)胞壁再生，進(jìn)而分裂和脫分化形成愈傷組織。

（3）從個體水平檢測成果的方法是將轉(zhuǎn)基因植株種植在鹽堿地，觀察其生長狀況。