Question

1．圖1表示含有目的基因D的DNA片段長度（bp即堿基對）和部分堿基序列，圖2表示一種質(zhì)粒結(jié)構(gòu)和部分堿基序列，現(xiàn)有MspⅠ、BamHⅠ、MboⅠ、SmaⅠ4種限制性核酸內(nèi)切酶切割的堿基序列和酶切位點(diǎn)分別為C↓CGG、G↓GATCC、↓GATC、CCC↓GGG．請回答下列問題：

（1）用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長度為537bp，790bp，661bp．
（2）一個基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還必須有啟動子、終止子以及標(biāo)記基因等．
（3）若將圖2中質(zhì)粒和目的基因D通過同種限制酶處理構(gòu)建基因表達(dá)載體，那么應(yīng)選用的限制酶是BamHⅠ，并通過DNA連接酶的作用恢復(fù)磷酸二酯鍵．
（4）檢測目的基因D是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出mRNA的方法是分子雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 分析圖1：圖中DNA片段含有2個限制酶SmaⅠ切割位點(diǎn)，可被限制酶SmaⅠ切割產(chǎn)生長度為534+3=537bp、796-3-3=790bp、658+3=661bp的三中DNA片段．
分析圖2：質(zhì)粒含有CCGG序列、GGATCC序列和GATC序列，其中CCGG序列可被限制酶MspⅠ切割，GGATCC序列和GATC序列可被限制酶MboⅠ切割．用限制酶BamHⅠ切割破壞了抗生素A抗性基因，但沒有破環(huán)抗生素B抗性基因，因此含有重組質(zhì)粒的大腸桿菌能抗抗生素B，但不能抗抗生素A．

解答 解：（1）用限制酶SmaⅠ完全切割圖1中DNA片段，其產(chǎn)物長度為537bp，790bp，661bp．
（2）一個基因表達(dá)載體的組成，除了目的基因外，還必須有啟動子、終止子和標(biāo)記基因．
（3）由圖1可知，目的基因兩側(cè)是GGATCC序列，該序列是限制酶BamHⅠ的識別序列，因此要將質(zhì)粒和目的基因D連接形成重組質(zhì)粒，應(yīng)選用限制酶BamHⅠ切割．并通過DNA連接酶的作用恢復(fù)磷酸二酯鍵．
（4）檢測目的基因D是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄出mRNA的方法是分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）SmaⅠ
（2）啟動子　終止子　標(biāo)記基因
（3）BamHⅠDNA連接　磷酸二酯
（4）分子雜交技術(shù)

點(diǎn)評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作工具及操作步驟，能結(jié)合圖中限制酶的識別序列判斷所選限制酶的種類，再根據(jù)抗性基因進(jìn)行篩選，同時能結(jié)合圖中和題中的數(shù)據(jù)答題．