Question

基因工程操作步驟中，需要從受體細胞群中篩選出已獲得目的基因的細胞，圖1中①-③示一種篩選方法的過程．pBR322質(zhì)粒含有兩個抗性基因，分別是Amp（氨芐青霉素）抗性基因和Tet（四環(huán)素）抗性基因，其中在Tet抗性基因上有下列目的基因的插入位點（插入將導致Tet抗性基因功能性失活），請回答：

（1）圖1中①過程所需的酶是

 

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（2）經(jīng)過①過程，ρBR322質(zhì)�？赡艹霈F(xiàn)的兩種結(jié)果A是

 

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（3）②過程表示用含四環(huán)素（使細胞停止生長，但不致死）和環(huán)絲氨酸（使生長的細胞致死）的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細菌甲，則培養(yǎng)結(jié)果C表示培養(yǎng)基中可以存活的細菌包括

 

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（4）若要進一步篩選出符合要求的受體細胞D，則③過程需要做的處理是（請參照過程②的方法）

 

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（5）基因工程中使用的Ⅱ型限制性核酸內(nèi)切酶通�？梢宰R別長度為4-8個核苷酸的特異序列．下面示限制酶Sau3AⅠ對DNA片段切割的結(jié)果．

請分析，Sau3AⅠ的識別序列以及切割位點（用“↓”表示）是

 

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（6）下表列出了幾種限制酶的識別序列及其切割位點，圖2（含兩個抗性基因的質(zhì)粒）和圖3（含目的基因的外源DNA）中箭頭表示相關(guān)限制酶的酶切位點．

限制酶	XhoⅠ	BclⅠ	SalⅠ	BamHⅠ	XbaⅠ
識別序列及酶切位點	C↓TCGAG	T↓GATCA	G↓TCGAC	G↓GATCC	T↓CTAGA

據(jù)圖2和圖3分析，為了使目的基因和質(zhì)粒實現(xiàn)定向連接和便于受體細胞的篩選，切割質(zhì)粒的限制酶應選用

 

，切割含目的基因的外源DNA的酶應選用

 

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Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：圖中所示為基因工程四步驟：圖3表示獲取目的基因，圖2圖3表示構(gòu)建基因表達載體，即①過程，將目的基因?qū)�入受體細胞A→B過程，目的基因的檢測與鑒定②③過程．

解答： 解：（1）①過程為構(gòu)建基因表達載體，需要對質(zhì)粒進行切割和與目的基因相連接，所以要用限制酶和DNA連接酶；
（2）①為構(gòu)建基因表達載體，會出現(xiàn)將目的基因與質(zhì)粒成功重組和重組失敗的結(jié)果，所以ρBR322會出現(xiàn)兩種結(jié)果，重組質(zhì)粒和未重組的質(zhì)粒；
（3）細菌有三類：含有質(zhì)粒（不是重組的）、含有重組質(zhì)粒的、不含有質(zhì)粒的．Tet抗性基因上有目的基因的插入位點，所以重組質(zhì)粒上沒有Tet抗性基因，成功導入重組質(zhì)粒的細菌和沒有導入的細菌均不含Tet抗性基因，即都不抗四環(huán)素，細胞可以在含四環(huán)素培養(yǎng)基上存活但不生長，而環(huán)絲氨酸會使生長的細胞致死，對不生長的細胞無影響，但會使含有抗四環(huán)素的細菌致死，所以C中成活的細菌有導入不成功的細菌和導入重組質(zhì)粒的細菌．
（4）經(jīng)過C后，現(xiàn)需要含重組質(zhì)粒的細菌，含重組質(zhì)粒的細菌含有Amp抗性基因，可在氨卡青霉素培養(yǎng)基中生長，而導入不成功的細菌會在其中死亡，所以可將經(jīng)過C存活的細菌轉(zhuǎn)入含氨卡青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)．
（5）根據(jù)圖中切割位點T和G及結(jié)果知所識別的序列應為
（6）用XbaⅠ和BclⅠ既不破壞目的基因又可將其完整切下，而獲取目的基因和重組質(zhì)粒所用限制酶應保持一致
故答案為：
（1）限制酶和DNA連接酶；
（2）重組質(zhì)粒和未重組質(zhì)粒；
（3）含有重組質(zhì)粒的細菌和導入不成功的細菌；
（4）將存活的細菌轉(zhuǎn)入含氨卡青霉素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；
（5）；
（6）XbaⅠ和BclⅠXbaⅠ和BclⅠ

點評：此題考查的內(nèi)容較多，主要是針對基因工程的工具特點進行考查，考查學生的識記及理解能力；理解限制酶切下的末端有哪些，及各自末端的特點，這是學生容易犯錯的地方需要注意；識記什么時候用限制酶和DNA連接酶，以及作為運載體需要哪些條件等，除此之外還考察了對于基因工程步驟考查，尤其是篩選含有重組質(zhì)粒的受體細胞方法，這個考點是個難點，也需要學生很好的理解篩選的依據(jù)即需要理解運載體各特點．