Question

13．高等植物苦蕎含有黃酮類化合物，有降血糖、降血脂作用．查爾酮合成酶（CHS）是黃酮類化合物合成的關(guān)鍵酶．如圖是將CHS基因?qū)�入苦蕎，培育高產(chǎn)黃酮類化合物苦蕎的過(guò)程．請(qǐng)回答：

（1）EcoRⅠ的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)是-G^↓AATTC-，CHS基因沒有EcoRⅠ的識(shí)別序列，與質(zhì)粒連接之前需在兩側(cè)連接相應(yīng)的末端，該末端序列為-TTAA，連接時(shí)需要用DNA連接酶酶．
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入苦蕎體細(xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）②是脫分化過(guò)程．苦蕎體細(xì)胞能培養(yǎng)成完整植株的根本原因是苦蕎體細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所需的全部基因（全部遺傳信息）．
（4）判斷轉(zhuǎn)基因苦蕎培育是否成功，可比較轉(zhuǎn)基因苦蕎與普通苦蕎的黃酮類化合物含量，也可測(cè)定細(xì)胞中CHS的含量．
（5）科研人員在培養(yǎng)基中加入6-BA（細(xì)胞分裂素類）和2，4-D，滅菌后分別接種苦蕎葉片細(xì)胞，在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，統(tǒng)計(jì)愈傷組織的誘導(dǎo)率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表：

該實(shí)驗(yàn)的目的是探究不同濃度6-BA和2，4-D對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織的影響，誘導(dǎo)的最佳組合是0.1mg•L^-16-BA和4mg•L^-12，4-D．

Answer 1

分析 基因工程的基本操作步驟主要包括四步：①目的基因的獲��；②基因表達(dá)載體的構(gòu)建；③將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞；④目的基因的檢測(cè)與鑒定．其中構(gòu)建基因表達(dá)載體是基因工程的核心步驟，需要限制酶和DNA連接酶．
植物組織培養(yǎng)技術(shù)包括脫分化和再分化兩個(gè)重要過(guò)程，而決定植物脫分化和再分化的關(guān)鍵因素是植物激素的種類和比例，特別是生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的協(xié)同作用在組織培養(yǎng)過(guò)程中非常重要．

解答 解：（1）EcoRⅠ的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)是-G^↓AATTC-，CHS基因沒有EcoRⅠ的識(shí)別序列，與質(zhì)粒連接之前需在兩側(cè)連接相應(yīng)的末端，據(jù)圖示可知，該黏性末端序列為-TTAA，連接時(shí)需要用DNA連接酶酶．
（2）將重組質(zhì)粒導(dǎo)入苦蕎體細(xì)胞采用最多的方法是農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法．
（3）過(guò)程②、③分別是脫分化和再分化．苦蕎體細(xì)胞能培養(yǎng)成植株的根本原因是植物細(xì)胞的全能性即細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所必需的全部基因．
（4）判斷轉(zhuǎn)基因苦蕎培育是否成功，可比較轉(zhuǎn)基因苦蕎與普通苦蕎的黃酮類化合物含量，也可測(cè)定細(xì)胞中CHS含量．
（5）根據(jù)題意和圖表分析可知：該實(shí)驗(yàn)的目的是探究不同濃度6-BA和2，4-D對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織的影響，自變量是6-BA和2，4-D的濃度，因變量是誘導(dǎo)率，誘導(dǎo)的最佳組合是0.1mg•L ^-16-BA和4mg•L^-12，4-D．
故答案為：
（1）-TTAA        DNA連接酶
（2）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法
（3）脫分化       苦蕎體細(xì)胞中含有發(fā)育成完整個(gè)體所需的全部基因（全部遺傳信息）
（4）黃酮類化合物
（5）探究不同濃度6-BA和2，4-D對(duì)誘導(dǎo)愈傷組織的影響   0.1mg•L ^-16-BA和4mg•L^-12，4-D

點(diǎn)評(píng) 本題綜合考查基因工程和植物細(xì)胞工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查考生的識(shí)記能力和理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，把握知識(shí)間內(nèi)在聯(lián)系，形成知識(shí)網(wǎng)絡(luò)的能力．