Question

【題目】下圖1為某種常用質粒的序列圖，Lac Z基因編碼的酶能使無色的X—gal變?yōu)樗{色，Ampr為氨芐青霉素抗性基因。圖2為目的基因的序列及其相關限制酶的識別序列。請回答下列問題：

（1）若要篩選成功導入目的基因的重組質粒，培養(yǎng)基中應加入的物質有________，構建重組質粒時需要的工具酶有_______________，對獲取的目的基因可用____________技術對其擴增。

（2）實驗小組用BamH I和Bgl II兩種限制酶切割目的基因和質粒，構建重組質粒后導入大腸桿菌中，在篩選重組質粒的培養(yǎng)基上，若大腸桿菌菌落顯藍色，說明導入了_____________。沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌_____________（填“能”或“不能”）在該培養(yǎng)基上生存。

（3）若質粒和目的基因用BamH I和Bgl II兩種限制酶切割后，用DNA連接酶相連，然后再用BamH I和EcoR I切割成功連接后的重組質粒，可獲得長度不同的_____________種DNA片段。（假定每一種限制酶都充分切割。）

Answer 1

【答案】 X—gal 氨芐青霉素 限制酶、DNA連接酶 沒有目的基因的空質粒 不能 2

【解析】【試題分析】

1.據圖分析可知，該實驗應該用用BamH I和Bgl II兩種限制酶切割目的基因和質粒，構建重組質粒。這樣，重組質粒上的Lac Z基因即被破壞，而不能合成能使無色的X—gal變?yōu)樗{色的酶，故導入了目的基因的重組質粒，培養(yǎng)基上的無色物質X—gal就不會變色。另外，質粒上的氨芐青霉素抗性基因Ampr，可作為標記基因，用于鑒別和篩選重組質粒。

2. 根據圖2相關限制酶的識別序列可知，BamH I和Bgl II兩種限制酶的識別序列不同，所以都不能在對方的切割位點進行切割。

（1）根據題意和上面分析可知，若要篩選成功導入目的基因的重組質粒，培養(yǎng)基中應加入的物質有X—gal和氨芐青霉素；構建重組質粒時需要的工具酶有限制酶、DNA連接酶。

（2）由上面分析可知，若大腸桿菌菌落顯藍色，說明導入了導入大腸桿菌的質粒上含有Lac Z基因，能合成使培養(yǎng)基中無色的X—gal變?yōu)樗{色的酶，即說明導入了沒有目的基因的空質粒；沒有導入任何外源DNA的大腸桿菌內沒有氨芐青霉素抗性基因Ampr，不能在含有氨芐青霉素的培養(yǎng)基上生存。

（3）根據圖2相關限制酶的識別序列和題意可知，用BamH I和Bgl II兩種限制酶切割后形成的重組質粒再用BamH I和EcoR I切割時，只能在這兩種限制酶識別和切割位點上進行切割，故可獲得長度不同的2種DNA片段。