Question

19．埃博拉病毒（EBO）是一種能夠引起人類產(chǎn)生埃博拉出血熱的強致死性RNA病毒．回答下列問題：
（1）提取EB0的RNA，通過逆轉(zhuǎn)錄形成DNA，然后采用PCR技術(shù)進行擴增．PCR是多聚酶鏈式反應的縮寫，是一項在體外復制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)．在反應體系中需要加入DNA模板、熱穩(wěn)定DNA聚合酶、引物、核苷酸原料等．EBO外殼蛋白，以EBO外殼蛋白為抗原制備疫苗題防埃博拉出
（2）利用基因工程方法制備EBO外殼蛋白，以EBO外殼蛋白為抗原制備疫苗題防埃博拉出血熱的一種有效策略．為了從牛分泌的乳汁中生產(chǎn)EBO外殼蛋白，在將基因?qū)�入牛受體細胞前，基因的前端段必須含有使其能在牛的乳腺細胞中特異性表達的（乳腺蛋白基因的）啟動子，才能驅(qū)動轉(zhuǎn)錄過程．這種通過分泌乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品的轉(zhuǎn)基因動物稱為乳腺（房）生物反應器．
（3）利用EBO作為抗原處理小鼠，然后提取小鼠的B淋巴細胞與骨髓瘤細胞進行融合形成雜交瘤細胞，以制備大量特異性強、靈敏度高的單克隆抗體．

Answer 1

分析 1、動物乳腺生物反應器是基于轉(zhuǎn)基因技術(shù)平臺，使外源基因?qū)�入動物基因組中并定位表達于動物乳腺，利用動物乳腺天然、高效合成并分泌蛋白的能力，在動物的乳汁中生產(chǎn)一些具有重要價值產(chǎn)品的轉(zhuǎn)基因動物的總稱．乳腺生物反應器是最理想的生物反應器，它的優(yōu)點：（1）藥物蛋白只在乳腺內(nèi)，對動物的生理活動不影響．（2）長期收集也不會對動物造成傷害．（3）產(chǎn)品成本低．（4）無論純化還是使用都很方便．
2、單克隆抗體制備流程：先給小鼠注射特定抗原使之發(fā)生免疫反應，之后從小鼠脾臟中獲取已經(jīng)免疫的B淋巴細胞；誘導B細胞和骨髓瘤細胞融合，利用選擇培養(yǎng)基篩選出雜交瘤細胞；進行抗體檢測，篩選出能產(chǎn)生特定抗體的雜交瘤細胞；進行克隆化培養(yǎng)，即用培養(yǎng)基培養(yǎng)和注入小鼠腹腔中培養(yǎng)；最后從培養(yǎng)液或小鼠腹水中獲取單克隆抗體．

解答 解：（1）以RNA為模板合成DNA的過程稱為逆轉(zhuǎn)錄；PCR是多聚酶鏈式反應的縮寫，是項在體外復制特定DNA片段的核酸合成技術(shù)；PCR的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）．
（2）基因表達載體的組成包括啟動子、目的基因、標記基因和終止子，因此要從牛分泌的乳汁中提取EBO外殼蛋白，在將EBO蛋白基因?qū)�入牛受體細胞前，需要在基因的前端加入使其能在牛的乳腺細胞中特異性表達的（乳腺蛋白基因的）啟動子．這種通過分泌乳汁來生產(chǎn)所需要的藥品的轉(zhuǎn)基因動物稱為乳腺（房）生物反應器．
（3）單克隆抗體最主要的優(yōu)點是特異性強，靈敏度高；在單克隆抗體的制備過程中，利用EBO作為抗原處理小鼠，然后提取小鼠的B淋巴細胞（漿細胞或效應B細胞）與骨髓瘤細胞進行融合，用特定的選擇培養(yǎng)基進行篩選獲得雜交瘤細胞，雜交瘤細胞還需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選就可獲得既能無限增殖，又能分泌特異性抗體的雜交瘤細胞．
故答案為：
（1）逆轉(zhuǎn)錄    多聚酶鏈式反應    特定DNA片段    熱穩(wěn)定DNA聚合酶       引物
（2）（乳腺蛋白基因的）啟動子    乳腺（房）生物反應器
（3）B淋巴細胞    單克隆抗體

點評 本題考查了基因工程和細胞工程的有關(guān)知識，要求考生掌握乳腺生物反應器的優(yōu)點和操作過程，識記單克隆抗體制備的過程、優(yōu)點及應用等方面的知識．