7.科研人員利用胚胎干細(xì)胞(ES細(xì)胞)對(duì)干擾素基因缺失小鼠進(jìn)行基因治療,其技術(shù)流程如圖1.圖2表示目的基因及限制酶切點(diǎn),圖3表示質(zhì)粒,據(jù)圖回答:

(1)將基因?qū)隕S細(xì)胞而不是導(dǎo)入上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有發(fā)育全能性.
(2)步驟③,需要構(gòu)建含有干擾素基因的基因表達(dá)載體.構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí),可以從下圖A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物(DNA復(fù)制子鏈的延伸方向5′→3′).
(3)對(duì)于干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行雙酶切時(shí),可選用限制酶的組合為HindIII和PstI或EcoRI和PstI.
(4)將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀(guān)察,選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo).為檢測(cè)干擾素基因是否表達(dá),可以采用抗原-抗體雜交的方法.

分析 分析圖1:①表示核移植過(guò)程;②表示早期胚胎培養(yǎng)過(guò)程;③表示將目的基因?qū)隕S細(xì)胞.
分析圖2:該DNA片段含有四種限制酶識(shí)別序列和切割位點(diǎn),其中SamⅠ酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上.
分析圖3:圖3為質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖,該質(zhì)粒含有2個(gè)標(biāo)記基因(紅色熒光標(biāo)記基因和綠色熒光標(biāo)記基因).

解答 解:(1)將基因?qū)隕S細(xì)胞而不是導(dǎo)入到上皮細(xì)胞是因?yàn)镋S細(xì)胞具有發(fā)育全能性.
(2)步驟③是將目的基因?qū)隕S細(xì)胞,該過(guò)程之前需要構(gòu)建基因表達(dá)載體;DNA復(fù)制只能從5’到3’,因此構(gòu)建前利用PCR技術(shù)擴(kuò)增干擾素基因時(shí),可以從圖2中A、B、C、D四種單鏈DNA片段中選取B和C作為引物.
(3)由圖可知,SamⅠ酶的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)位于目的基因上,用該酶切割會(huì)破壞目的基因,因此對(duì)干擾素基因片段和質(zhì)粒進(jìn)行酶切時(shí),可選用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ.
(4)用限制酶HindⅢ和PstⅠ或EcoRⅠ和PstⅠ切割時(shí)會(huì)破壞紅色熒光蛋白基因,但不會(huì)破壞綠色熒光蛋白基因,因此將步驟③獲得的ES細(xì)胞在熒光顯微鏡下觀(guān)察,選擇發(fā)綠色熒光的細(xì)胞進(jìn)行體外誘導(dǎo).為檢測(cè)干擾素基因是否表達(dá),可以采用抗原-抗體雜交法.
故答案為:
(1)發(fā)育全能性    
(2)基因表達(dá)載體   B和C
(3)HindIII和PstI     EcoRI和PstI    
(4)綠     抗原-抗體雜交

點(diǎn)評(píng) 本題以基因治療的流程圖為載體,考查了基因工程、細(xì)胞工程以及胚胎工程等方面的知識(shí),難度適中.考生要能夠識(shí)記細(xì)胞核移植的過(guò)程;識(shí)記囊胚包括內(nèi)細(xì)胞團(tuán)和滋養(yǎng)層兩部分;明確基因工程中質(zhì)粒和目的基因需要利用同種限制酶進(jìn)行切割;掌握目的基因檢測(cè)和鑒定的一般方法等.

練習(xí)冊(cè)系列答案
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天然的玫瑰沒(méi)有藍(lán)色花,這是由于缺少控制藍(lán)色色素合成的基因B,而開(kāi)藍(lán)色花的矮牽牛中存在序列己知的基因B�,F(xiàn)用基因工程技術(shù)培育藍(lán)玫瑰,下列操作正確的是

A.提取矮牽牛藍(lán)色花的mRNA,經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄獲得互補(bǔ)的DNA,再擴(kuò)增基因B

B.利用限制性核酸內(nèi)切酶從開(kāi)藍(lán)色花矮牽牛的基因文庫(kù)中獲取基因B

C.利用DNA聚合酶將基因B與質(zhì)粒連接后導(dǎo)入玫瑰細(xì)胞

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15.在本屆運(yùn)動(dòng)會(huì)上小明同學(xué)參加了男子1500米,下列有關(guān)他在比賽時(shí)的描述正確的是( �。�
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2.下列對(duì)實(shí)驗(yàn)的相關(guān)敘述正確的是(  )
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19.下列敘述與現(xiàn)代生物進(jìn)化理論不相符合的是(  )
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