Question

【題目】如圖表示構(gòu)建均由35S啟動子驅(qū)動的CMO基因與BADH基因的植物雙基因表達載體，圖中標注了相關(guān)限制酶的酶切位點，35S表示啟動子及其方向．Nos表示終止子，hpt表示潮霉素抗性基因．請據(jù)圖分析回答：
（1）從功能上分析，35S是識別和結(jié)合的部位，Nos的功能主要是 ．
（2）過程①應(yīng)利用兩種限制酶切割，酶切后回收載體A的大片段和CMO基因片段，加入含有酶的緩沖液，獲得載體C．進而在過程②中，利用兩種限制酶切割載體C和載體D，獲得載體E．
（3）利用凍融法將載體E導(dǎo)入農(nóng)桿菌中，制備成菌液LB．將無菌煙草葉片切成0.4cm2大小，加入到菌液LB中浸泡10min，以便 ． 用無菌濾紙吸干葉片表面菌液，注入MS培養(yǎng)基，暗培養(yǎng)3d后轉(zhuǎn)入到含有的培養(yǎng)基中，篩選培養(yǎng)出含載體E的煙草若干株．
（4）利用DNA分子雜交技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)呈陽性的煙草植株，再進一步利用抗原﹣抗體雜交方法檢測到均有表達的煙草植株．

Answer 1

【答案】
（1）RNA聚合酶；終止轉(zhuǎn)錄
（2）SacⅠ、SmaⅠ； DNA連接； HindⅢ、BstEⅡ
（3）充分導(dǎo)入目的基因；潮霉素
（4）CMO基因與BADH基因
【解析】解：（1）分析題干信息可知，從功能上分析，35S是啟動子，啟動子是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位；Nos表示終止子，因此Nos的功能主要是終止轉(zhuǎn)錄．（2）分析圖解可知，過程①應(yīng)利用SacⅠ、SmaⅠ兩種限制酶切割目的基因和載體A，酶切后回收載體A的大片段和CMO基因片段，加入含有DNA連接酶的緩沖液，獲得載體C．在過程②中，要用相同的限制酶切割目的基因和載體C，因此需要利用HindⅢ、BstEⅡ兩種限制酶切割載體C和載體D，獲得載體E．（3）利用凍融法將載體E導(dǎo)入農(nóng)桿菌中，制備成菌液LB．將無菌煙草葉片切成0.4cm2大小，加入到菌液LB中浸泡10min，以便充分導(dǎo)入目的基因．根據(jù)題意可知，“hpt表示潮霉素抗性基因”，該基因作為運載體上的標記基因，因此培養(yǎng)基中應(yīng)該加入潮霉素．（4）利用DNA分子雜交技術(shù)檢測發(fā)現(xiàn)呈陽性的煙草植株，再進一步利用抗原﹣抗體雜交方法檢測到CMO基因與BADH基因均有表達的煙草植株．

所以答案是：（1）RNA聚合酶 終止轉(zhuǎn)錄（2）SacⅠ、SmaⅠDNA連接 HindⅢ、BstEⅡ（3）充分導(dǎo)入目的基因 潮霉素（4）CMO基因與BADH基因

【考點精析】利用基因工程的原理及技術(shù)對題目進行判斷即可得到答案，需要熟知基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)．