Question

【題目】如圖是利用大腸桿菌生產(chǎn)埃博拉病毒（EBOV）VP40蛋白的過程．請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）①利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因的過程中，反應(yīng)體系內(nèi)要加入 ， PCR的全稱是 ， 第次復(fù)制的產(chǎn)物中才開始出現(xiàn)目的基因．
（2）過程②構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)選用EcoRI和XhoI雙酶切的優(yōu)點(diǎn)是 ， 目的基因與質(zhì)粒連接形成重組DNA后含有個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．
（3）基因表達(dá)載體A的組成除了目的基因外，還必須有 ， 過程③VP40基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，該過程可稱為 ．
（4）檢測(cè)過程④是否成功表達(dá)，通常從分子水平進(jìn)行檢測(cè)的方法是 ．

Answer 1

【答案】
（1）含有VP40基因的DNA、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶；聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；3
（2）防止酶切產(chǎn)物之間的隨意連接，提高連接成功率；0
（3）標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子；轉(zhuǎn)化
（4）抗原﹣抗體雜交
【解析】解：（1.）PCR擴(kuò)增時(shí)，需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板結(jié)合的引物、四種脫氧核苷酸和Taq 酶．PCR的全稱是聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，由于引物A和引物B均不在該片段的端點(diǎn)，因此第一輪循環(huán)后，得到的兩DNA片段中兩條脫氧核苷酸鏈都不等長(zhǎng)；通過繪圖可推知，第二輪中亦不會(huì)出現(xiàn)等長(zhǎng)的引物，所以在第三輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條核苷酸鏈等長(zhǎng)的DNA片段．
（2.）EcoRI和XhoI切割形成的黏性末端不同，而DNA連接酶只能將具有相同黏性末端的DNA片段連接起來，因此為了防止目的基因反向粘連和質(zhì)粒自行環(huán)化，酶切時(shí)可選用的酶是EcoRI和XhoI，提高連接成功率；目的基因與質(zhì)粒連接形成重組DNA后，形成的是環(huán)狀DNA，因此含有0個(gè)游離的磷酸基團(tuán)．
（3.）基因表達(dá)載體A的組成除了目的基因外，還必須有標(biāo)記基因、啟動(dòng)子、終止子；VP40基因進(jìn)入大腸桿菌細(xì)胞，并在大腸桿菌內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)，該過程可稱為轉(zhuǎn)化．
（4.）檢測(cè)過程④是否成功表達(dá)，通常從分子水平進(jìn)行檢測(cè)的方法是抗原﹣抗體雜交．
【考點(diǎn)精析】本題主要考查了基因工程的原理及技術(shù)的相關(guān)知識(shí)點(diǎn)，需要掌握基因工程的原理是利用DNA重組技術(shù)才能正確解答此題．