Question

【題目】白僵菌可感染農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)，常作為防治害蟲(chóng)的菌劑。由于白僵菌對(duì)除草劑草丁膦敏感，且殺死害蟲(chóng)的能力較弱，科研人員將Bar基因（抗除草劑基因）和毒蛋白基因?qū)�入白僵菌進(jìn)行基因工程改造，流程如圖所示：

（1）從蘇云金芽孢桿菌中獲取的毒蛋白基因，通過(guò)____技術(shù)可在體外大量擴(kuò)增。該擴(kuò)增過(guò)程需要____種引物，所需添加的酶是____。

（2）圖中形成重組質(zhì)粒1過(guò)程需要的限制酶是____；形成重組質(zhì)粒2除了需要限制酶 XbaⅠ外，還需要____。

（3）將重組質(zhì)粒2導(dǎo)入經(jīng)____處理成為感受態(tài)的白僵菌。一段時(shí)間后用含有____的平板培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，獲得含有Bar基因的重組白僵菌。

（4）科研人員將重組白僵菌噴涂于植物葉片上，以此飼喂饑餓處理的害蟲(chóng)，記錄單位時(shí)間內(nèi)的____，以判斷重組白僵菌的殺蟲(chóng)效果。

Answer 1

【答案】 PCR 兩 熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶） Nco I、 BamH I DNA連接酶 Ca2+ 草丁膦 死亡害蟲(chóng)數(shù)

【解析】試題分析：分析圖解：圖中首先利用NcoI、BamHI兩種限制酶切割目的基因和質(zhì)粒，然后再用DNA連接酶形成重組質(zhì)粒，利用兩種限制酶可以防止目的基因和質(zhì)粒自身連接；然后再利用XbaI酶分別切割重組質(zhì)粒1和Bar基因，再構(gòu)建重組質(zhì)粒2。

（1）根據(jù)題意可知，可以用PCR技術(shù)體外獲得大量毒蛋白基因片段，該擴(kuò)增過(guò)程需要2種引物與兩條母鏈配對(duì)，并需要熱穩(wěn)定性DNA聚合酶，因?yàn)閿U(kuò)增的第三步需要加熱至70～75℃，熱穩(wěn)定DNA聚合酶從引物起始互補(bǔ)鏈的合成。

（2）據(jù)圖分析，毒蛋白基因兩端是NcoI、BamHI作用位點(diǎn)，因此需要NcoI、BamHI將毒蛋白基因和質(zhì)粒切割，另需要DNA連接酶連接，獲得重組質(zhì)粒l。

（3）將重組質(zhì)粒2與用鈣離子處理處于感受態(tài)的白僵菌菌液混合進(jìn)行轉(zhuǎn)化，重組質(zhì)粒2在白僵菌細(xì)胞內(nèi)被修復(fù)．一段時(shí)間后用含有草丁膦的平板培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，獲得含有Bar基因的重組白僵菌。

（4）科研人員將重組白僵菌噴涂于植物葉片上，以此飼喂饑餓處理的害蟲(chóng)，記錄單位時(shí)間內(nèi)的死亡害蟲(chóng)數(shù)，以判斷重組白僵菌的殺蟲(chóng)效果。