18．內(nèi)皮素（ET）是一種含21個(gè)氨基酸的多肽，具有強(qiáng)烈的血管收縮和促進(jìn)平滑肌細(xì)胞增殖等作用，其功能異常與高血壓、糖尿病、癌癥等有著密切聯(lián)系．ET主要通過與靶細(xì)胞膜上的ET受體結(jié)合而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)．ET_A是ET的主要受體，科研人員試圖通過構(gòu)建表達(dá)載體，實(shí)現(xiàn)ET_A基因在細(xì)胞中高效表達(dá)，為后期ET_A的體外研究以及拮抗劑的篩選、活性評(píng)價(jià)等奠定基礎(chǔ)．其過程如圖所示，圖中SNAP基因是一種熒光蛋白基因，限制酶ApaⅠ的識(shí)別序列為CCC^↓GGG，限制酶XhoⅠ的識(shí)別序列為C^↓TCGAG．請(qǐng)分析回答：

（1）完成過程①需要加入緩沖液、原料、逆轉(zhuǎn)錄酶和ATP和引物等，過程①的最后階段要將反應(yīng)體系的溫度升高到95℃，其目的是使RNA鏈和DNA鏈分開．
（2）過程③和⑤中，限制酶XhoⅠ切割DNA，使磷酸二酯鍵斷開，形成的黏性末端是；用兩種限制酶切割，獲得不同的黏性末端，其主要目的是使目的基因定向連接到載體上，以防止目的基因自身環(huán)化．
（3）構(gòu)建的重組表達(dá)載體，目的基因上游的啟動(dòng)子的作用是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，驅(qū)動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄，除圖示結(jié)構(gòu)外，完整的基因表達(dá)載體還應(yīng)具有復(fù)制原點(diǎn)、終止子等結(jié)構(gòu)（至少寫出兩個(gè)結(jié)構(gòu)）．
（4）過程⑥中，要用CaCl₂預(yù)先處理大腸桿菌，使其成為處于容易吸收外界DNA的感受態(tài)的細(xì)胞．
（5）利用SNAP基因與ET_A基因結(jié)合構(gòu)成融合基因，目的是檢測(cè)ET_A基因能否表達(dá)及表達(dá)量．

17．圖1和圖2分別表示兩種獲取胚胎干細(xì)胞的途徑．圖1表示的是科學(xué)家把4個(gè)與胚胎發(fā)育相關(guān)的特異性基因?qū)�入成年小鼠�?xì)胞，培養(yǎng)出了誘導(dǎo)多潛能干細(xì)胞，稱為iPS細(xì)胞，類似于胚胎干細(xì)胞樣細(xì)胞，再將iPS細(xì)胞轉(zhuǎn)入小鼠乙體內(nèi)培養(yǎng)，結(jié)果如圖所示．圖2表示研究人員利用小鼠（2N=40）獲取單倍體胚胎干細(xì)胞的一種方法，哺乳動(dòng)物單倍體胚胎干細(xì)胞技術(shù)是遺傳學(xué)研究的新手段．請(qǐng)分析并回答下列問題：

（1）圖1過程中，通常選擇傳代培養(yǎng)10代以內(nèi)的成纖維細(xì)胞導(dǎo)入特異性基因；成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)閕PS細(xì)胞，類似于植物組織培養(yǎng)中的脫分化過程．
（2）克隆培養(yǎng)iPS細(xì)胞時(shí)，需要加入一定量的抗生素，以防止雜菌污染．早期研究發(fā)現(xiàn)在 iPS 細(xì)胞誘導(dǎo)培養(yǎng)的過程中會(huì)出現(xiàn)大量不具備干細(xì)胞功能的細(xì)胞，若用維生素C處理，能顯著提高iPS細(xì)胞的誘導(dǎo)成功率，推測(cè)其原因是維生素C可誘導(dǎo)其基因重編程．
（3）研究人員將iPS細(xì)胞團(tuán)注射入缺乏T細(xì)胞的小鼠體內(nèi)，細(xì)胞團(tuán)能繼續(xù)生長(zhǎng)．由此可推測(cè)圖1中iPS細(xì)胞團(tuán)逐漸退化的原因是小鼠乙（受體）發(fā)生免疫反應(yīng)．
（4）圖2中，研究人員需要對(duì)實(shí)驗(yàn)小鼠丙注射促性腺激素使其超數(shù)排卵，從而獲得更多的卵母細(xì)胞，再利用SrC1₂溶液處理、激活卵母細(xì)胞，并在體外培養(yǎng)至[④]囊胚期，再利用流式細(xì)胞儀篩選出單倍體細(xì)胞．
（5）研究發(fā)現(xiàn)，單倍體胚胎干細(xì)胞也能分化，形成不同功能的細(xì)胞、組織和器官，該技術(shù)培育的單倍體動(dòng)物可成為研究隱性（填“顯性”或“隱性”）基因功能的理想細(xì)胞模型．

16．為了從動(dòng)物組織中提取純凈的DNA，首先要快速、有效地消化裂解動(dòng)物組織細(xì)胞．消化裂解動(dòng)物組織常用的方法有蛋白酶（如蛋白酶K）水解、表面活性劑處理、變性劑處理等．某科研人員擬使用加酶洗衣粉消化裂解豬肌肉樣本，并提取豬的DNA．實(shí)驗(yàn)步驟如下：
①取500mg剪碎的豬肌肉組織于離心管中，加40mg加酶洗衣粉和1.5mL超純水混合，在一定溫度條件下水浴消化24h；
②加入苯酚、氯仿、異丙醇（25：24：1）混合液使蛋白質(zhì)變性，抽提蛋白質(zhì)；
③加0.2mg/mL的RNA水解酶于37℃水浴1h；
④加醋酸鈉和無水乙醇，高速離心15min；
⑤用70%乙醇洗滌沉淀兩次，風(fēng)干，得到高純度的DNA．
請(qǐng)回答有關(guān)問題：
（1）加酶洗衣粉可以消化裂解動(dòng)物組織細(xì)胞的原理是洗衣粉中的蛋白酶和表面活性劑等可以破壞細(xì)胞膜．
（2）步驟③的目的是水解RNA，去除雜質(zhì)，步驟④中使用無水乙醇的目的是析出DNA，提取含雜質(zhì)較少的DNA．
（3）將提取到的DNA用2mol/L的NaCl溶液溶解后，與二苯胺試劑共熱，冷卻后可觀察到溶液呈藍(lán)色．
（4）實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，實(shí)驗(yàn)前將新鮮的豬肌肉組織置于液氮冷藏，與室溫下放置相同時(shí)間的等量豬肌肉組織相比，提取到的DNA含量較多，最可能的原因是低溫抑制了DNA酶的活動(dòng)，減少DNA降解．
（5）如果要將加酶洗衣粉法提取DNA與蛋白酶K法提取DNA的效果進(jìn)行對(duì)比，請(qǐng)簡(jiǎn)要說明實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思路將加酶洗衣粉換成蛋白酶K，重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)步驟，得到DNA后，測(cè)定DNA的量和純度，并與加酶洗衣粉組比較．

15．酵母菌作為一種常見的微生物，在傳統(tǒng)和現(xiàn)代生物技術(shù)中得到了廣泛的應(yīng)用．請(qǐng)回答下列問題：
（1）酵母菌廣泛分布在自然界中，科研人員為了分離、篩選藍(lán)莓果酒專用酵母來改善藍(lán)霉果酒的品質(zhì)，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)：
①取不同品種的成熟藍(lán)莓制果漿，置于適宜溫度的恒溫培養(yǎng)箱中自然發(fā)酵，直至產(chǎn)生大量氣泡和明顯酒味．取不同品種成熟藍(lán)莓的原因是不同品種藍(lán)莓上附著有不同品種的酵母菌．
②將藍(lán)莓發(fā)酵液用無菌水進(jìn)行梯度稀釋后，進(jìn)行涂布平板操作（每個(gè)梯度3個(gè)平板），恒溫培養(yǎng)2d，根據(jù)酵母菌菌落特征挑取單菌落．
③將挑取的單菌落擴(kuò)大培養(yǎng)后，通過平板劃線法分離純化，然后保存菌種．
④檢測(cè)篩選菌株的發(fā)酵性能，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果推知，BF-17（品種）對(duì)乙醇和酸的耐受性最強(qiáng)，是較理想的釀酒菌種．

品  種	乙醇體積分?jǐn)?shù)/%					pH
	8%	10%	12%	14%	15%	4.00	2.98	2.03	1.48
葡萄釀酒酵母	++++	++++	+	-	-	++++	++++	-	-
BL-21	++++	++++	+	-	-	++++	++++	-	-
BF-09	++++	++++	++	-	-	++++	++++	+	-
BF-17	++++	++++	++	+	-	++++	++++	++	-

（注：+數(shù)量表示菌落數(shù)量的多少，-表示沒有菌落生長(zhǎng)）
（2）如圖是固定化酵母發(fā)酵與游離酵母制作藍(lán)莓果酒發(fā)酵的對(duì)比結(jié)果，從圖中可以看出，兩者發(fā)酵速率相近，但發(fā)酵前期游離發(fā)酵比固定發(fā)酵產(chǎn)生的酒精量多，主要原因是游離酵母和營養(yǎng)液的接觸更充分，酒精排出更快；后期游離酵母發(fā)酵速度減慢，除了底物濃度降低外，還可能是因?yàn)榫凭珜?duì)游離酵母的抑制作用更強(qiáng)．相較于固定化酶技術(shù)，固定化酵母細(xì)胞常用的方法是包埋法，固定化酵母發(fā)酵的主要優(yōu)點(diǎn)是可固定一系列酶，催化一系列化學(xué)反應(yīng)．

14．花青素是構(gòu)成花瓣和果實(shí)顏色的主要色素之一．廣泛存在于深紅色、紫色或藍(lán)色的蔬菜水果中，在酸性條件下偏紅，堿性條件下偏藍(lán)．
（1）牽�；ǖ幕ò觐伾�主要由花青素決定．凌晨3：00時(shí)，花瓣的顏色偏紅，理由是黑暗條件下，牽�；ㄖ贿M(jìn)行呼吸作用，細(xì)胞內(nèi)二氧化碳含量較高，細(xì)胞液pH值下降，偏酸，使花青素顯示偏紅．
（2）為了使食品有花青素的顏色，需要進(jìn)行色素的提取，工藝流程如下：
實(shí)驗(yàn)原料$→_{添加金屬離子研磨}^{加75%酒精}$組織勻漿$→_{攪拌、離心}^{水浴保溫70分鐘}$上清液→測(cè)花青素提取率
若從食品安全角度考慮，研磨時(shí)對(duì)加入的酒精和金屬離子有一共同的要求是要對(duì)人無害或有益．興趣小組分別對(duì)水浴溫度進(jìn)行了探究實(shí)驗(yàn)．結(jié)果顯示，水浴溫度在69-71℃范圍內(nèi)，提取率較高．他們認(rèn)為要達(dá)到最高提取率，還必須對(duì)水浴溫度進(jìn)行優(yōu)化，并確定以此為探究課題．請(qǐng)為探究實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)一張實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄表（注意體現(xiàn)實(shí)驗(yàn)溫度的變化）

水浴溫度	69℃			70℃			71℃
分組編號(hào)	A	B	C	A	B	C	A	B	C
提取率
平均提取率

．
（3）紫色洋蔥鱗片葉外表皮細(xì)胞中也含有花青素而呈紫色．在“觀察植物細(xì)胞的質(zhì)壁分離和復(fù)原”實(shí)驗(yàn)中，對(duì)紫色洋蔥鱗片葉外表皮臨時(shí)裝片進(jìn)行了三次觀察（如圖所示）．

第一次觀察時(shí)可觀察到紫色大液泡幾乎充滿細(xì)胞，大液泡周圍只有很薄的無色區(qū)域，原因是表皮展平在清水中，細(xì)胞吸水，液泡體積增大，幾乎充滿細(xì)胞．第二次觀察時(shí)可發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的質(zhì)壁分離首先發(fā)生在細(xì)胞的角隅處，此時(shí)細(xì)胞液的濃度將變大（增加），無色區(qū)域充滿蔗糖（外界）溶液．某學(xué)生在第三次觀察時(shí)，發(fā)現(xiàn)質(zhì)壁分離不能復(fù)原，原因之一是蔗糖溶液濃度過高（或質(zhì)壁分離時(shí)間過長(zhǎng)），細(xì)胞已死亡．

13．為了研究光合作用與呼吸作用的關(guān)系，科研人員進(jìn)行了觀察與實(shí)驗(yàn)，并繪出相關(guān)坐標(biāo)圖．請(qǐng)回答下列問題：

（1）圖1為電鏡下觀察繪制的亞顯微結(jié)構(gòu)模式圖，圖1中①和③結(jié)構(gòu)的基本支架是磷脂雙分子層；光照條件下，結(jié)構(gòu)②中形成的產(chǎn)物有ATP、[H]、O₂；光照條件下，結(jié)構(gòu)④中酶的主要功能是催化光合作用的暗反應(yīng)．
（2）圖2表示某種植物黑暗條件下，在O₂濃度分別為a、b、c、d時(shí)CO₂釋放量和O₂吸收量的關(guān)系．假定細(xì)胞呼吸的底物都是葡萄糖，在O₂濃度為d時(shí)細(xì)胞的呼吸方式是（只進(jìn)行）有氧呼吸，當(dāng)O₂濃度為a時(shí)，無氧呼吸消耗的葡萄糖是有氧呼吸消耗的葡萄糖的5倍．
（3）圖3表示光照和溫度等適宜條件下，某種植物放在封閉溫室大棚內(nèi)，測(cè)得大棚中一晝夜CO₂濃度變化的坐標(biāo)圖．圖3的 A、B、C、D四個(gè)點(diǎn)中，光合產(chǎn)物積累最多的是C點(diǎn)．大田作物夏季中午光合速率明顯下降的過程稱作光合作用的午休現(xiàn)象，原因是夏季中午，植物體因溫度過高過度失水導(dǎo)致氣孔局部關(guān)閉，CO₂供應(yīng)不足，導(dǎo)致暗反應(yīng)減弱而出現(xiàn)午休現(xiàn)象．據(jù)圖3推測(cè)該植物光合作用有無午休現(xiàn)象？無．若連續(xù)三天，該大棚的環(huán)境條件保持不變，則該植物的總重量發(fā)生的變化是增加．

12．圖甲、圖乙分別是兩類高等生物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)模式圖，請(qǐng)據(jù)圖回答：

（1）若圖甲表示洋蔥葉肉細(xì)胞，則④中CO₂進(jìn)入⑨中被利用至少通過4層生物膜；若圖甲表示洋蔥根尖分生區(qū)細(xì)胞，則圖中不應(yīng)該具有的細(xì)胞器有⑨⑩（填編號(hào)）．
（2）在圖甲、圖乙所示細(xì)胞中，含有遺傳物質(zhì)的結(jié)構(gòu)有③④⑨（填編號(hào)），不含生物膜結(jié)構(gòu)的細(xì)胞器有⑦⑧（填編號(hào)）．
（3）結(jié)構(gòu)②在圖甲細(xì)胞和圖乙細(xì)胞的功能不同，圖甲細(xì)胞中②結(jié)構(gòu)的功能是與細(xì)胞壁的形成有關(guān)．在甲、乙細(xì)胞內(nèi)，都能合成ATP的場(chǎng)所是④⑥ （填編號(hào)）．
（4）若圖乙所示的細(xì)胞為胰島B細(xì)胞，將³H標(biāo)記的氨基酸注入該細(xì)胞，在該細(xì)胞的結(jié)構(gòu)中，³H出現(xiàn)的先后順序是⑦→⑤→②→①（用箭頭和編號(hào)表示）．

11．下面是幾組同學(xué)所做的部分實(shí)驗(yàn)，回答下列問題：

組別	實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/TD>	實(shí)驗(yàn)材料	所用試劑
①	植物組織中還原性糖的鑒定	西瓜汁	斐林試劑
②	植物細(xì)胞中脂肪的鑒定	花生子葉	酒精、蘇丹Ⅲ染液
③	生物組織中蛋白質(zhì)的鑒定	血漿	雙縮脲試劑
④	探究溫度對(duì)酶活性的影響	淀粉、淀粉酶	斐林試劑
⑤	探究酵母菌的呼吸方式	酵母菌、葡萄糖溶液	澄清石灰水、重鉻酸鉀

（1）上述各組實(shí)驗(yàn)中，所選材料不合理的一組是①．所用試劑不合理的一組是④（以上均填表中序號(hào)），原因是斐林試劑鑒定還原糖需要水浴加熱，會(huì)破壞該實(shí)驗(yàn)設(shè)定的溫度條件，影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的鑒定，正確的試劑應(yīng)選用碘液．
（2）實(shí)驗(yàn)②中，酒精的作用是洗浮色，與其他實(shí)驗(yàn)相比，需用顯微鏡（儀器）進(jìn)行觀察．
（3）雞血中蛋白質(zhì)含量豐富，若用雞全血做蛋白質(zhì)的鑒定實(shí)驗(yàn)，需增加的實(shí)驗(yàn)步驟是將雞全血靜置，待血細(xì)胞沉淀后，取上清液進(jìn)行實(shí)驗(yàn)．
（4）實(shí)驗(yàn)⑤按照如圖裝置進(jìn)行操作，如果兩組裝置中的澄清石灰水都變渾濁，能否說明酵母菌既能進(jìn)行有氧呼吸，又能進(jìn)行無氧呼吸？否，對(duì)實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象準(zhǔn)確的描述應(yīng)該是兩組裝置中的澄清石灰水都變渾濁，但甲組裝置中渾濁程度更大．

10．圖中①②③分別表示物質(zhì)跨膜運(yùn)輸?shù)娜�種方式，下列表述正確的是（　　）

	A．	脂溶性小分子物質(zhì)能通過方式①運(yùn)輸
	B．	葡萄糖的跨膜運(yùn)輸?shù)姆绞綖棰诨颌?/td>
	C．	方式③的最大運(yùn)輸速率與載體蛋白數(shù)量有關(guān)
	D．	抑制細(xì)胞呼吸對(duì)方式②和③的轉(zhuǎn)運(yùn)速率均有很大影響

9．脂質(zhì)體是以磷脂等物質(zhì)制備的中空膜泡狀結(jié)構(gòu)的人工膜，可用于介導(dǎo)基因的轉(zhuǎn)移．傳統(tǒng)的脂質(zhì)體是將磷脂、膽固醇或其它脂類的乙醚溶液加入到DNA溶液中，經(jīng)特殊處理而得到單層或雙層的包裹DNA的脂質(zhì)體小泡，其可被受體細(xì)胞內(nèi)吞而實(shí)現(xiàn)基因轉(zhuǎn)移．下列說法錯(cuò)誤的是（　�。�

	A．	脂質(zhì)體介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移的原理是膜的流動(dòng)性，可適用于多種動(dòng)物受體細(xì)胞
	B．	若以植物細(xì)胞作為受體細(xì)胞，轉(zhuǎn)移前對(duì)植物細(xì)胞去壁可提高轉(zhuǎn)移效率
	C．	動(dòng)物細(xì)胞膜具有特異性糖蛋白，對(duì)導(dǎo)入的脂質(zhì)體小泡會(huì)產(chǎn)生免疫反應(yīng)
	D．	可在包埋有抗癌藥物的脂質(zhì)體表面插入單克隆抗體，介導(dǎo)癌癥的治療