Question

14．如圖是利用β-乳球蛋白（BLG）基因5′端調(diào)控序列和人乳鐵蛋白（hLF）基因構(gòu)建能在羊乳腺細胞特異性表達的運載體的簡要流程圖，請據(jù)圖回答下列問題：

（1）②為PCR過程，除了要加入引物、原料外還需要加入耐高溫的DNA聚合酶、模板，在此過程中引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸．
（2）BamH I的識別序列為-G↓GATTC-，Hind III的識別序列為-A↓AGCTT-，選用這兩種酶進行操作的意義是避免目的基因和運載體產(chǎn)生的末端任意連接（環(huán)化連接），除此之外，③過程還需要DNA連接酶．
（3）BLG基因5′端調(diào)控序列能使hLF基因在羊的乳腺細胞中特異性表達，這是因為BLG基因5′端調(diào)控序列作為啟動子，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動hLF基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（4）要獲得能表達目的基因的羊，應(yīng)將重組質(zhì)粒導入羊的受精卵（填“乳腺細胞”或“去核卵細胞”、“受精卵”），獲得優(yōu)良胚胎后，為了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法來處理胚胎．

Answer 1

分析 分析題圖：圖示為利用β-乳球蛋白（BLG）基因5′端調(diào)控序列和人乳鐵蛋白（hLF）基因構(gòu)建能在羊乳腺細胞特異性表達的運載體的簡要流程圖，其中①為逆轉(zhuǎn)錄過程，②為獲取目的基因的過程，③表示基因表達載體的構(gòu)建過程．

解答 解：（1）PCR技術(shù)的條件：模板DNA（目的基因）、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶），其中引物的作用是使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸．
（2）BamH I的識別序列為-G↓GATTC-，Hind III的識別序列為-A↓AGCTT-，選用這兩種酶進行操作時產(chǎn)生的黏性末端不同，這樣可以避免目的基因和運載體產(chǎn)生的末端任意連接（環(huán)化連接）；③為基因表達在的構(gòu)建過程，該過程首先需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA和運載體，其次還需要DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA．
（3）BLG基因5′端調(diào)控序列能使hLF基因在羊的乳腺細胞中特異性表達，這是因為BLG基因5′端調(diào)控序列作為啟動子，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動hLF基因轉(zhuǎn)錄出mRNA．
（4）培育轉(zhuǎn)基因動物時，應(yīng)該以受精作為受體細胞，因為受精卵的全能性最高，且具有促進全能性表達的物質(zhì)；來自同一個胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)，因此為了提高胚胎的利用率，常采用胚胎分割的方法來處理胚胎．
故答案為：
（1）耐高溫的DNA聚合酶、模板       使DNA聚合酶能夠從引物的3′端開始連接脫氧核苷酸
（2）避免目的基因和運載體產(chǎn)生的末端任意連接（環(huán)化連接）      DNA連接
（3）BLG基因5′端調(diào)控序列作為啟動子，是RNA聚合酶識別和結(jié)合的部位，能驅(qū)動hLF基因轉(zhuǎn)錄出mRNA
（4）受精卵          胚胎分割

點評 本題結(jié)合圖解，考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的概念、原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能正確分析題圖，再結(jié)合所學的知識準確答題．