Question

【題目】下圖為三種質(zhì)粒和一個含目的基因的片段的示意圖。復(fù)制原點(diǎn)是質(zhì)粒能正常復(fù)制的必需組成。圖中Ap為氨芐青霉素抗性基因，Tc為四環(huán)素抗性基因，lcZ為藍(lán)色顯色基因，lacZ正常表達(dá)菌落呈藍(lán)色。EcoRⅠ、PvuⅠ為相應(yīng)的限制酶切割位點(diǎn)，括號內(nèi)的數(shù)據(jù)是該切點(diǎn)與復(fù)制原點(diǎn)的距離，單位為kb(1kb=1000個堿基對)�；卮鹣铝袉栴}：

（1）用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)該選擇質(zhì)粒________(填“質(zhì)粒A”“質(zhì)粒B”或者“質(zhì)粒C”)，選擇的限制酶是___________。

（2）轉(zhuǎn)錄的起始部位稱為____________，是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，它是RNA聚合酶______________________的部位。

（3）如果選擇的質(zhì)粒與目的基因重組成功，并且在受體細(xì)胞中能正常表達(dá)，則所形成的重組質(zhì)粒用EcoRⅠ完全酶切，并進(jìn)行電泳觀察，可出現(xiàn)的片段長度有_____________或____________。

（4）導(dǎo)入大腸桿菌后，為了篩選出含目的基因的大腸桿菌，在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入_________，形成的菌落顏色為_____________。

Answer 1

【答案】 質(zhì)粒B PvuⅠ 啟動子 識別與結(jié)合 3.6kb、3.1kb 1.1kb、5.6kb 氨芐青霉素 白色

【解析】試題分析：質(zhì)粒A缺少標(biāo)記基因、質(zhì)粒C在用和目的基因相同的限制酶切割時，復(fù)制原點(diǎn)會被限制酶切割，會影響重組質(zhì)粒的自主復(fù)制，所以質(zhì)粒A、C不能作為基因工程的運(yùn)載體，質(zhì)粒B可以作為載體；由圖可知，獲取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割質(zhì)粒B也用該限制酶。

（1）據(jù)試題分析可知，用圖中的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建基因表達(dá)載體時，應(yīng)該選擇質(zhì)粒B；由圖可知，獲取目的基因使用的限制酶是PvuⅠ，所以切割質(zhì)粒B也用該限制酶。

（2）啟動子是一段有特殊結(jié)構(gòu)的DNA片段，位于基因的首端，是DNA轉(zhuǎn)錄的起點(diǎn)；是RNA聚合酶識別與結(jié)合的部位。

（3）要將目的基因和質(zhì)粒B形成重組質(zhì)粒，需用PvuⅠ限制酶，目的基因和質(zhì)粒B形成的重組質(zhì)粒長度為2.7-0.1+（4.0-1.0）=5.6kb（質(zhì)粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時形成的大片段）、0.1+1.0=1.1kb（質(zhì)粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時形成的小片段）或2.7-0.1+1.0=3.6（質(zhì)粒且切割后形成的大的片段+切割目的基因時形成的小片段）、0.1+3.0=3.1（質(zhì)粒且切割后形成的小的片段+切割目的基因時形成的大片段）。

（4）含目的基因的重組質(zhì)粒B含有的標(biāo)記基因是Ap（氨芐青霉素抗性基因），所以含目的基因的大腸桿菌也含有Ap（氨芐青霉素抗性基因），因此在普通瓊脂培養(yǎng)基中還需加入氨芐青霉素可以篩選出來；在目的基因與質(zhì)粒B構(gòu)建基因表達(dá)載體時，選擇的限制酶是PvuⅠ，破壞了lacZ基因，因此形成的菌落顏色為白色。