Question

【題目】中國倉鼠卵巢細胞（CHO細胞）能夠高效表達外源基因�？茖W(xué)研究中常使用重組CHO細胞（導(dǎo)入了重組載體的CHO細胞）大量生產(chǎn)外源蛋白，一般步驟為：Ⅰ.長期傳代培養(yǎng)，獲得大量重組細胞；Ⅱ.批式培養(yǎng)，獲得大量外源蛋白。

（1）體外培養(yǎng)動物細胞的基本培養(yǎng)液（BM）中除抗生素和一般營養(yǎng)物質(zhì)外，還應(yīng)含有_______。為了獲得能生產(chǎn)抗體A的重組 CHO 細胞，需要將含有抗體A基因的重組載體通過________法導(dǎo)入CHO細胞，經(jīng)篩選獲得重組CHO 細胞。

（2）研究發(fā)現(xiàn)，酵母抽提物（YE）在動物細胞培養(yǎng)和促進蛋白質(zhì)表達中具有重要作用。為確定YE在不同培養(yǎng)階段的使用策略，研究人員進行了下列實驗。

①圖1所示實驗探究了在長期傳代培養(yǎng)階段________對重組CHO細胞增殖以及抗體A表達量的影響。通過細胞計數(shù)和計算得出實驗結(jié)果如圖2所示，結(jié)果說明________。此處理對后續(xù)批式培養(yǎng)中的細胞增殖及單個細胞的抗體產(chǎn)量基本無影響。

②進一步探究YE對批式培養(yǎng)階段的影響，應(yīng)在階段Ⅰ、Ⅱ分別使用___________和________進行培養(yǎng)。結(jié)果表明，抗體A的總產(chǎn)量隨著 YE 濃度的提高而增加。

③綜上所述，為提高抗體A的總產(chǎn)量，整個培養(yǎng)過程中對YE的使用策略是________。

Answer 1

【答案】 動物血清 顯微注射 不同濃度的YE 較低濃度YE促進細胞增殖，較高濃度YE抑制細胞增殖 BM 添加不同濃度YE的BM 傳代培養(yǎng)過程中添加低濃度YE，批式培養(yǎng)過程中添加高濃度YE

【解析】試題分析：本題考查基因工程、細胞工程，考查對基因工程操作步驟、動物細胞培養(yǎng)條件的理解。解答此題，可根據(jù)不同培養(yǎng)階段YE作用的不同特點選擇提高抗體A的總產(chǎn)量的策略。

（1）體外培養(yǎng)動物細胞的基本培養(yǎng)液（BM）中除抗生素和一般營養(yǎng)物質(zhì)外，一般加入動物血清，以滿足細胞生命活動的需要。將重組載體導(dǎo)入動物細胞，一般選用顯微注射法。

（2）①圖1所示實驗不同組實驗的自變量是YE的不同濃度，探究的是在長期傳代培養(yǎng)階段不同濃度的YE對重組CHO細胞增殖以及抗體A表達量的影響。根據(jù)圖2可知，長期傳代培養(yǎng)階段YE濃度為1g/L時細胞數(shù)目最多，較低濃度YE促進細胞增殖，較高濃度YE抑制細胞增殖。

②圖1所示實驗探究了在長期傳代培養(yǎng)階段不同濃度的YE對重組CHO細胞增殖以及抗體A表達量的影響，探究YE對批式培養(yǎng)階段的影響，可將圖示1培養(yǎng)步驟顛倒，應(yīng)在階段Ⅰ使用BM進行培養(yǎng)，在階段Ⅱ添加不同濃度YE的BM。

③長期傳代培養(yǎng)階段YE濃度為1g/L時細胞數(shù)目最多，較低濃度YE促進細胞增殖，較高濃度YE抑制細胞增殖，該處理對后續(xù)批式培養(yǎng)中的細胞增殖及單個細胞的抗體產(chǎn)量基本無影響；批式培養(yǎng)階段抗體A的總產(chǎn)量隨著 YE 濃度的提高而增加，因此為提高抗體A的總產(chǎn)量，可在傳代培養(yǎng)過程中添加低濃度YE，批式培養(yǎng)過程中添加高濃度YE。