Question

肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌．研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)后，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制．該基因工程技術(shù)基本流程如圖．

（1）基因工程的步驟中，進(jìn)行過(guò)程①為

 

（2）進(jìn)行過(guò)程②時(shí)，需用

 

酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞，以利于細(xì)胞培養(yǎng)．
（3）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因能影響癌基因RAS的表達(dá)，其影響機(jī)理如圖2．據(jù)圖分析，可從細(xì)胞中提取

 

進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄．肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中

 

（RASmRNA/RAS蛋白質(zhì)）含量減少引起的．
（4）某線性DNA分子分別用限制酶HindⅢ和SmaⅠ處理，然后用這兩種酶同時(shí)處理，得到如下片段（kb為千個(gè)堿基對(duì)）：
HindⅢ：2.5kb，5.0kb；
SmaⅠ：2.0kb，5.5kb；
HindⅢ和SmaⅠ：2.5kb，3.0kb，2.0kb；
限制酶HindⅢ和SmaⅠ在此DNA分子中各有1個(gè)識(shí)別序列．兩酶同時(shí)處理后得到的片段，再用限制酶EcoRⅠ處理，結(jié)果導(dǎo)致凝膠上3.0kb的片段消失，產(chǎn)生了1.5kb的新片段．請(qǐng)?jiān)诮o出的DNA分子上標(biāo)注限制酶HindⅢ、SmaⅠ、EcoRⅠ的切割位點(diǎn)：

 

（5）在生物工程中，為了獲得足夠數(shù)量的受精卵，先利用

 

刺激供體雌性鼠超數(shù)排卵．
（6）胚胎干細(xì)胞形態(tài)上具有

 

的特性．

Answer 1

考點(diǎn)：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：1、分析題圖：圖1表示利用基因工程技術(shù)將let一7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞的流程，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過(guò)程；②表示用胰蛋白酶處理組織細(xì)胞，使之成為單個(gè)細(xì)胞，再加細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程．
2、圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達(dá)的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制．

解答： 解：（1）基因工程的步驟中，進(jìn)行過(guò)程①將let-7和載體形成重組DNA，即基因表達(dá)載體的構(gòu)建．
（2）過(guò)程②表示動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)過(guò)程中出現(xiàn)接觸抑制后可以用胰蛋白酶處理，使之分散成單個(gè)的細(xì)胞，之后分裝到其他培養(yǎng)瓶里面進(jìn)行傳代培養(yǎng)．
（3）判斷目的基因是否在受體細(xì)胞中轉(zhuǎn)錄，可用分子雜交技術(shù)來(lái)進(jìn)行，從細(xì)胞中提取mRNA和用放射性同位素或者熒光標(biāo)記的目的基因單鏈DNA片段進(jìn)行雜交．根據(jù)題中信息“肺組織細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)就增強(qiáng)，引發(fā)肺癌”導(dǎo)入let7基因后，肺癌細(xì)胞受到抑制，說(shuō)明RAS基因表達(dá)減弱，導(dǎo)致細(xì)胞中的RAS蛋白質(zhì)含量減少進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞受抑制．
（4）線性DNA分子在限制酶HindⅢ的切割下形成2.5kb和5.0kb的片段，因此限制酶HindⅢ在該DNA分子上具有一個(gè)酶切位點(diǎn)；同理可得，限制酶SmaⅠ在該DNA分子上也具有一個(gè)酶切位點(diǎn)．兩種酶同時(shí)切割時(shí)，根據(jù)所得片段可以判斷，限制酶HindⅢ的酶切位點(diǎn)在DNA分子左側(cè)的2.5kb處，限制酶SmaⅠ的酶切位點(diǎn)在DNA分子右側(cè)的2.0kb處，中間剛好有個(gè)3.0kb的片段．再用限制酶EcoRⅠ處理，結(jié)果導(dǎo)致凝膠上3.0kb的片段消失，產(chǎn)生一個(gè)1.5kb的新片段，說(shuō)明限制酶EcoRⅠ的酶切位點(diǎn)就在3.0kb片段的中間位置．具體位置如下：

（5）在生物工程中，利用促性腺激素刺激供體雌性鼠超數(shù)排卵，獲得足夠數(shù)量的受精卵．
（6）胚胎干細(xì)胞形態(tài)上具有體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯的特性．
故答案為：
（1）基因表達(dá)載體的構(gòu)建　　
（2）胰蛋白酶
（3）RNA　RAS蛋白  
（4）
（5）促性腺激素
（6）體積較小，細(xì)胞核大，核仁明顯

點(diǎn)評(píng)：查基因工程的原理和技術(shù)、遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具和操作步驟，能分析圖1，準(zhǔn)確判斷各過(guò)程的名稱；識(shí)記動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程和條件，掌握遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)過(guò)程，能利用圖2信息答題．