Question

1．肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌．研究人員在體外利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制，其影響機(jī)理如圖，請(qǐng)回答下列問(wèn)題：
（1）利用基因工程技術(shù)抑制肺癌細(xì)胞的增殖過(guò)程中，還需使用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)．
（2）獲取let-7基因后欲進(jìn)行基因擴(kuò)增應(yīng)采用PCR技術(shù)，其依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制．
（3）基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程中需使用的工具有限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和運(yùn)載體．將基因表達(dá)載體導(dǎo)入肺癌細(xì)胞的常用方法是顯微注射法．
（4）根據(jù)圖示分析，可從細(xì)胞中提取RNA進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄．肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中RAS蛋白（RASmRNA/RAS蛋白）含量減少引起的．

Answer 1

分析 根據(jù)題意和圖示分析可知：
圖示表示let-7基因影響癌基因RAS的表達(dá)的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制．

解答 解：（1）在體外利用基因工程技術(shù)抑制肺癌細(xì)胞的增殖過(guò)程中，需將轉(zhuǎn)基因細(xì)胞進(jìn)行增殖，故需使用動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)．
（2）目的基因擴(kuò)增常采用PCR技術(shù)，其依據(jù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制．
（3）基因表達(dá)載體構(gòu)建過(guò)程中需使用核酸內(nèi)切酶切割目的基因和運(yùn)載體，后用DNA連接酶形成重組DNA，用運(yùn)載體作為目的基因的載體．將基因表達(dá)載體導(dǎo)入動(dòng)物細(xì)胞的常用方法是顯微注射法．
（4）根據(jù)圖示分析，可從細(xì)胞中提取RNA進(jìn)行分子雜交，以直接檢測(cè)let-7基因是否轉(zhuǎn)錄．let-7轉(zhuǎn)錄形成的RNA可與RASmRNA形成雙鏈，從而阻止RAS蛋白的表達(dá)過(guò)程，故肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中RAS蛋白含量減少引起的．

故答案為：
（1）動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 
（2）PCR  DNA雙鏈復(fù)制 
（3）限制性核酸內(nèi)切酶、DNA連接酶和運(yùn)載體  顯微注射法 
（4）RNA   RAS

點(diǎn)評(píng) 本題考查基因工程的原理和技術(shù)、遺傳信息的轉(zhuǎn)錄和翻譯的相關(guān)知識(shí)，要求考生識(shí)記基因工程的工具和操作步驟，并能利用圖示信息答題．