Question

【題目】圓褐固氮菌能將大氣中的氮氣轉(zhuǎn)化為氨，是異養(yǎng)需氧型的原核生物。某同學(xué)利用稀釋涂布平板法從土壤中分離獲得圓褐固氮菌。回答下列問題。

（1）圓褐固氮菌與硝化細(xì)菌在同化作用過程上的最主要區(qū)別在于圓褐園氮菌_____。培養(yǎng)圓褐固氮菌時不能隔絕空氣，其原因是__________(答出兩點)。

（2）稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，分離不同的微生物需要不同的稀釋倍數(shù)，原因是_______________________________________________。

（3）工作者將三個接種了等量同樣稀釋倍數(shù)培養(yǎng)液的培養(yǎng)基置于37°C的恒溫箱中培養(yǎng)。24h后觀察到三個平板上的菌落數(shù)目分別為19、197、215，該結(jié)果出現(xiàn)的可能原因是__________________。為獲得更科學(xué)的三個平板上的數(shù)據(jù)，請?zhí)岢鼋鉀Q方案：________________________。

（4）若用固定化酶技術(shù)固定圓褐固氮菌產(chǎn)生的固氮酶，和一般酶制劑相比，其優(yōu)點是_________，且利于產(chǎn)物的純化；固定化目的菌細(xì)胞常用______法固定化。

Answer 1

【答案】不能將CO2轉(zhuǎn)化為含碳有機物 圓褐固氮菌為需氧型生物，且其需要空氣中的氮氣作為氮源 (單位質(zhì)量)土壤中不同種類的微生物數(shù)量不同 涂布第一個平板時涂布器未冷卻就涂布平板 重做實驗 可重復(fù)利用；既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離 包埋

【解析】

稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細(xì)胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細(xì)胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細(xì)胞分散開，使成單個細(xì)胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細(xì)胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細(xì)胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

（1）硝化細(xì)菌屬于自養(yǎng)型細(xì)菌，可以利用化學(xué)反應(yīng)放出的能量將CO2還原為糖類。圓褐固氮菌能將大氣中的氮氣轉(zhuǎn)化為氨，是異養(yǎng)需氧型的原核生物。圓褐固氮菌與硝化細(xì)菌在同化作用過程上的最主要區(qū)別在于圓褐園氮菌不能將CO2轉(zhuǎn)化為含碳有機物。培養(yǎng)圓褐固氮菌時不能隔絕空氣，其原因是圓褐固氮菌為需氧型生物，且其需要空氣中的氮氣作為氮源。

（2）稀釋涂布平板法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目，(單位質(zhì)量)土壤中不同種類的微生物數(shù)量不同，因此分離不同的微生物需要不同的稀釋倍數(shù)。

（3）三個平板上的菌落數(shù)目分別為19、197、215，19這個結(jié)果特別少偏離正常，該結(jié)果出現(xiàn)的可能原因是涂布第一個平板時涂布器未冷卻就涂布平板。因為含有19這個異常數(shù)據(jù)，為獲得更科學(xué)的三個平板上的數(shù)據(jù)，只能重做實驗。

（4）固定化酶是將水溶性酶用物理或化學(xué)方法處理，使之成為不溶于水的，但仍具有酶活性的狀態(tài)的一種技術(shù)。一般酶制劑和產(chǎn)物混合在一起，難分離，且再次利用變得困難，固定化酶技術(shù)固定圓褐固氮菌產(chǎn)生的固氮酶，其優(yōu)點是可重復(fù)利用；既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，且利于產(chǎn)物的純化。目的菌體積較大，固定化目的菌細(xì)胞常用包埋法固定化。