Question

生物技術(shù)實(shí)踐
（1）商品化植酸酶主要來(lái)自微生物．在產(chǎn)酶菌株篩選過(guò)程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生

 

，可根據(jù)其大小選擇目的菌株，所得菌株需要進(jìn)一步測(cè)定植酸酶活性．活性測(cè)定可以植酸鈉作為底物，活性可用一定條件下單位時(shí)間

 

表示．
（2）利用上述所得菌株制備植酸酶的流程如圖：

Ⅰ中的主要成分為

 

；Ⅱ中包含多種酸酶等多種蛋白質(zhì)．請(qǐng)寫(xiě)出一種純化得到植酸酶的方法及其依據(jù)．
（3）為建設(shè)基因工程菌，可用PCR等技術(shù)從上述菌株中克隆植酸酶基因．PCR反應(yīng)包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步：

 

．反應(yīng)過(guò)程中打開(kāi)模板DNA雙鏈的方法是

 

．
（4）除植酸酶外，微生物還應(yīng)用在

 

的生產(chǎn)中．

Answer 1

考點(diǎn)：蛋白質(zhì)的提取和分離

專(zhuān)題：

分析：植酸酶能使植酸鈣分解成易溶于水的植酸和金屬離子，這是植酸鈣制備植酸的途徑；PCR技術(shù)是利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)．

解答： 解：（1）根據(jù)選擇培養(yǎng)基的原理，在產(chǎn)酶菌株篩選過(guò)程中，常在基本培養(yǎng)基中添加不溶于水的植酸鈣制成固體平板，植酸鈣被植酸酶分解后可在平板上產(chǎn)生透明圈，如果需要進(jìn)一步測(cè)定植酸酶活性，可用一定條件下單位時(shí)間表示．酶活性鑒定可以用一定條件下單位時(shí)間內(nèi)底物消耗量或反應(yīng)生成物量表示．
（2）由菌株制備植酸酶的流程圖可知：透析的目的是去除小分子雜質(zhì)，Ⅰ中透析液的主要成分為小分子雜質(zhì)．
純化得到植酸酶的方法，凝膠色譜法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子大小，吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化．（或電泳法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷，分子大小等差異進(jìn)行純化．）
（3）PCR技術(shù)是利用DNA雙鏈復(fù)制的原理，PCR反應(yīng)包含多次循環(huán)，每次循環(huán)包括三步：變性，復(fù)性，延伸．反應(yīng)過(guò)程中打開(kāi)模板DNA雙鏈的方法是加熱，使雙鏈打開(kāi)．
（4）商品化植酸酶主要來(lái)自微生物，除植酸酶外，微生物還應(yīng)用在蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶的生產(chǎn)中．
故答案為：
（1）透明圈     植酸鈣的消耗量（肌醇和磷酸的生成量）
（2）小分子雜質(zhì)
凝膠色譜法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間分子大小，吸附性質(zhì)等差異進(jìn)行純化．（或電泳法：根據(jù)蛋白質(zhì)之間電荷，分子大小等差異進(jìn)行純化．）
（3）變性、復(fù)性和延伸      加熱
（4）蛋白酶、脂肪酶、纖維素酶

點(diǎn)評(píng)：本題考查對(duì)微生物的分離和培養(yǎng)，蛋白質(zhì)的純化，酶活性鑒定等知識(shí)，結(jié)合實(shí)際應(yīng)用．