Question

【題目】肺細(xì)胞中的let-7基因表達(dá)減弱，癌基因RAS表達(dá)增強(qiáng)，會(huì)引發(fā)肺癌。研究人員利用基因工程技術(shù)將let-7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá)，發(fā)現(xiàn)肺癌細(xì)胞的增殖受到抑制。該基因工程技術(shù)基本流程如圖1。請(qǐng)回答：

（1）進(jìn)行過程①時(shí)，需用相關(guān)酶切開載體以插入let-7基因，該酶破壞的化學(xué)鍵是___________。重組載體應(yīng)有RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，該部位稱為___________，同時(shí)，重組載體還應(yīng)有___________以驅(qū)動(dòng)自身復(fù)制以及___________以鑒別受體細(xì)胞是否含有目的基因。

（2）進(jìn)行過程②時(shí)，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到表面___________時(shí)，需用___________酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞并進(jìn)行________________后繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）研究發(fā)現(xiàn)，let-7基因影響癌基因RAS表達(dá)的機(jī)理如圖2所示。據(jù)圖分析，肺癌細(xì)胞增殖受到抑制，可能是由于細(xì)胞中_________含量減少引起的，作出該假設(shè)的依據(jù)是_________________________。

Answer 1

【答案】 磷酸二酯鍵 啟動(dòng)子 復(fù)制原點(diǎn) 標(biāo)記基因 相互接觸 胰蛋白（膠原蛋白） 分瓶 RAS蛋白 miRNA和RASmRNA互補(bǔ)配對(duì)，抑制了翻譯過程;據(jù)圖分析可知，RASmRNA和沒有翻譯功能的miRNA結(jié)合后能抑制RAS基因的翻譯，所以細(xì)胞中RAS蛋白質(zhì)的含量減少

【解析】試題分析：分析圖1：圖1表示利用基因工程技術(shù)將let一7基因?qū)�入肺癌�?xì)胞的流程，其中①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建過程；②表示用胰蛋白酶處理組織細(xì)胞，使之成為單個(gè)細(xì)胞，再加細(xì)胞懸液進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)的過程；分析圖2：圖2表示let-7基因影響癌基因RAS的表達(dá)的原理，let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制。

（1）過程①表示基因表達(dá)載體的構(gòu)建，在該過程中需要用限制性核酸內(nèi)切酶（簡(jiǎn)稱限制酶）對(duì)載體進(jìn)行切割，以便于目的基因的插入，該酶切割的是DNA分子中的磷酸二脂鍵。重組質(zhì)粒上的啟動(dòng)子是RNA聚合酶識(shí)別和結(jié)合的部位，復(fù)制原點(diǎn)可以啟動(dòng)質(zhì)粒的自我復(fù)制，標(biāo)記基因可以鑒別受體細(xì)胞是否含有目的基因。

（2）過程②表示用胰蛋白酶處理組織細(xì)胞獲得單個(gè)細(xì)胞的過程，當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)到表面相互接觸時(shí)，需用胰蛋白酶或者膠原蛋白酶處理貼附在培養(yǎng)皿壁上的細(xì)胞并進(jìn)行分瓶后繼續(xù)培養(yǎng)。

（3）據(jù)圖2可知，let-7基因影響RAS基因表達(dá)的機(jī)理是：let-7基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物miRNA與RAS基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物RAS mRNA結(jié)合，使RAS基因翻譯受到抑制，引起細(xì)胞中的RAS蛋白含量減少，進(jìn)而導(dǎo)致癌細(xì)胞增殖受到抑制。