Question

【題目】草甘膦的除草機制是抑制植物體內(nèi)EPSPS酶的合成，最終導(dǎo)致植物死亡。但它的使用有時也會影響到農(nóng)作物的正常生長。目前，已發(fā)現(xiàn)可以從一種抗草甘膦的大腸桿菌突變株中分離出EPSPS基因，若將該基因轉(zhuǎn)入農(nóng)作物植物細胞內(nèi)，從而獲得的轉(zhuǎn)基因植物就能耐受高濃度的草甘膦。

（1）將圖1①的DNA用HindⅢ、BamHⅠ完全酶切后，反應(yīng)管中有 種DNA片段。

（2）假設(shè)圖1中質(zhì)粒原來BamHⅠ識別位點的堿基序列變?yōu)榱肆硪环N限制酶BclⅠ的堿基序列，現(xiàn)用BclⅠ和HindⅢ切割質(zhì)粒，則該圖1中①的DNA右側(cè)還能選擇BamHⅠ進行切割，并獲得所需重組質(zhì)粒嗎？______ 請說明理由 。

（3）若上述假設(shè)成立，并成功形成重組質(zhì)粒，則重組質(zhì)粒( )

A．既能被BamHⅠ也能被HindⅢ切開

B．能被BamHⅠ但不能被HindⅢ切開

C．既不能被BamHⅠ也不能被HindⅢ切開

D．能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開

(4）要想檢測導(dǎo)入的EPSPS基因是否表達，在分子水平上可用 方法進行檢測。

Answer 1

【答案】（1）4 （2）能 切割后露出的黏性末端相同 （3）D （4）抗原-抗體雜交

【解析】（1）由于上述兩種酶形成的末端不一樣，所以被兩種不同的限制酶切割之后所形成的片段有AA、AB、BA、BB四種切法形成的四種片段。（2）設(shè)A表示HindⅢ，B表示BamHⅠ。同時被兩種限制酶切割有兩種不同的目的基因，即AB和BA，所以重組質(zhì)粒有兩種。Bstl與BamHⅠ酶切割的末端一樣，所以同時用這兩種限制酶切割只能形成一種目的基因，所以只能形成一種重組質(zhì)粒，重組質(zhì)粒的形成需用DNA連接酶將目的與質(zhì)粒相連；質(zhì)粒要進行復(fù)制才能更多的表達出產(chǎn)物，所以重組之后要能復(fù)制。（3）根據(jù)酶切位點和識別的堿基序列可知，重組質(zhì)粒只能被能被HindⅢ但不能被BamHⅠ切開。（4）從圖22可知，a鏈形成是以DNA一條鏈作為模板進行轉(zhuǎn)錄形成的信使RNA分子，不同組織細胞的相同DNA在轉(zhuǎn)錄時，如果是相同基因一般轉(zhuǎn)錄起點相同，不同的基因轉(zhuǎn)錄起點不同，檢測目的基因是否在受體細胞內(nèi)表達的分子水平上的檢測是向分泌物中加入抗體，通過抗原—抗體特異性結(jié)合形成雜交帶加以檢測，如果能形成，說明表達了，如果不能形成，說明沒有表達。