Question

為增加油菜種子的含油量，研究人員嘗試將酶D基因與位于葉綠體膜上的轉(zhuǎn)運肽基因相連，導(dǎo)人油菜細胞并獲得了轉(zhuǎn)基因油菜品種．
（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計引物，采用

 

法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因．從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因．所含三種限制酶（ClaⅠ、SacⅠ、XbaⅠ）的切點如圖所示．則用

 

和

 

酶處理兩個基因后，可得到

 

 （填圖中字母）端相連的融合基因．

（2）將上述融合基因插入如圖所示質(zhì)粒的T-DNA中．構(gòu)建

 

并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含

 

的固體平板上培養(yǎng)得到含融合基因的單菌落，再利用

 

培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入染液中一段時間，此過程的目的是

 

．進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)獲因油菜細胞．該細胞通過

 

技術(shù)．可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA．在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下獲得cDNA．再依據(jù)

 

的DNA片段設(shè)計引物進行擴增．對擴增結(jié)果進行檢側(cè)．可判斷融合是否完成

 

．
（5）用

 

法可檢測轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．

Answer 1

考點：基因工程的原理及技術(shù)

專題：

分析：基因文庫包括cDNA文庫、基因組文庫等．某個群體包含一種生物所有的基因的文庫叫基因組文庫，而用某種生物發(fā)育的某個時期的mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的多種互補DNA片段屬于cDNA文庫

解答： 解：（1）研究人員依據(jù)基因的已知序列設(shè)計引物，采用PCR法從陸地棉基因文庫中獲取酶D基因，從擬南芥基因文庫中獲取轉(zhuǎn)運肽基因．在上述引物設(shè)計時，分別在引物中加入如圖甲所示酶的識別序列，這樣可以用ClaⅠ限制酶和DNA連接酶處理兩個基因后，得到A、D端相連的融合基因．
（2）將上述融合基因插入圖乙所示Ti質(zhì)粒的T-DNA中，構(gòu)建表達載體即重組質(zhì)粒并導(dǎo)入農(nóng)桿菌中．將獲得的農(nóng)桿菌接種在含四環(huán)素的固體平板上培養(yǎng)得到單菌落，再利用液體培養(yǎng)基震蕩培養(yǎng)，可以得到用于轉(zhuǎn)化的浸染液．
（3）剪取油菜的葉片放入侵染液中一段時間，此過程的目的是利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細胞，進一步篩選后獲得轉(zhuǎn)基因油菜細胞．該細胞通過植物組織培養(yǎng)技術(shù)，可培育成轉(zhuǎn)基因油菜植株．
（4）提取上述轉(zhuǎn)基因油菜的mRNA，在逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下獲得cDNA，再依據(jù)融合基因的DNA片段設(shè)計引物進行擴增，對擴增結(jié)果進行檢測，可判斷融合基因是否完成轉(zhuǎn)錄．
（5）用抗原-抗體雜交法可檢測轉(zhuǎn)基因油菜植株中的融合基因是否成功表達．
故答案為：
（1）PCR    ClaⅠDNA連接    A、D  
（2）基因表達載體（或重組質(zhì)粒）    四環(huán)素       液體
（3）利用農(nóng)桿菌將融合基因?qū)�入油菜細�?nbsp;  植物組織培養(yǎng)
（4）融合基因      轉(zhuǎn)錄 
（5）抗原-抗體雜交

點評：本題以增加油菜種子的含油量為材料背景，考查基因工程的相關(guān)知識，意在考查學(xué)生的識圖能力和判斷能力，運用所學(xué)知識綜合分析問題和解決問題的能力．