Question

【題目】尼古丁是一種化學物質(zhì)，該物質(zhì)對人類有致畸、致癌等毒副作用。下圖是從工業(yè)廢水中篩選出能降解尼古丁的假單胞桿菌的操作流程圖。請回答下列相關(guān)問題：

（1）培養(yǎng)基中要有滿足微生物生長繁殖所需要的___________等營養(yǎng)物質(zhì)。制備平板培養(yǎng)基與稀釋用的培養(yǎng)基主要的區(qū)別在于制備平板培養(yǎng)基時，其中需要添加___________。

（2）選擇培養(yǎng)時應(yīng)使用選擇培養(yǎng)基，目的是使該培養(yǎng)基利于__________________的生長繁殖。對選擇培養(yǎng)后得到的樣液進行稀釋操作的具體過程是：①將分別盛有9mL水的5支試管苗菌，并按101—105的順序編號；②______________________。③重復第②步的混勻操作，依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。

（3）取105倍的稀釋樣液0.1mL均勻涂布到平板上，然后在適宜條件下進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)時需要將培養(yǎng)皿倒置，原因是____________________；經(jīng)過一段時間培養(yǎng)，3個平板上的菌落數(shù)分別為42、52和68，則每升樣液中所含有的假單孢桿菌活菌數(shù)量為__________個，這一統(tǒng)計結(jié)果一般比實際活菌數(shù)__________（填“偏小”“偏大”或“相等”）。

Answer 1

【答案】水、無機鹽、碳源和氮源瓊脂（或凝固劑）假單胞桿菌（或目的菌）用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中并混勻，再從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的是試管中防止冷凝水落到培養(yǎng)基上引起污染5.4×1010偏小

【解析】

微生物的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基一般都含有水、碳源、氮源、無機鹽，此外還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。微生物的接種方法有平板劃線法與稀釋涂布平板法，其中稀釋涂布平板法可用于微生物的計數(shù)。用稀釋涂布平板法測定同一樣品中的假單胞桿菌數(shù)時，在每一個梯度濃度內(nèi)，至少要涂布3個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的進行記數(shù)，求其平均值，再通過計算得出樣品中的假單孢桿菌活菌總數(shù)。

（1）微生物的生長繁殖需要的營養(yǎng)物質(zhì)有水、無機鹽、碳源和氮源，平板培養(yǎng)基屬于固體培養(yǎng)基，制備時需要加入瓊脂（或凝固劑）。

（2）選擇培養(yǎng)的目的是增加所需微生物的濃度，該培養(yǎng)基有利于假單胞桿菌（或目的菌）的生長繁殖，同時能抑制或阻止其他微生物的繁殖，對選擇培養(yǎng)后得到的樣液進行稀釋操作的具體過程是：①將分別盛有9mL水的5支試管苗菌，并按101—105的順序編號；②用移液管吸取1mL培養(yǎng)的菌液，注入101倍稀釋的試管中并混勻，再從101倍稀釋的試管中吸取1mL稀釋液，注入102倍稀釋的是試管中。③重復第②步的混勻操作，依次類推，直到完成最后一支試管的稀釋。

（3）涂布好平板后，在適宜條件下進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)時需要將培養(yǎng)皿倒置，其原因是防止凝結(jié)在皿蓋上的冷凝水落到培養(yǎng)基表面引起污染，3個平板上的菌落數(shù)分別為42、52和68，3個平板上的菌落的平均數(shù)為（42+52+68）/3=54個，則每升樣液中所含有的假單孢桿菌活菌數(shù)量為54/0.1×105×103=5.4×1010個。因為當兩個或多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落，因此這一統(tǒng)計結(jié)果一般比實際活菌數(shù)偏小。