Question

1．根據(jù)基因工程有關(guān)內(nèi)容回答下列問題：
（1）在基因工程的基本操作程序中，核心的步驟是基因表達載體的構(gòu)建．
（2）構(gòu)建基因的表達載體時，需要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接起來．
（3）利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物．
（4）常用的將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是用Ca²⁺（或CaCl₂）處理受體細胞，使其成為能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．
（5）某農(nóng)科院開展“轉(zhuǎn)基因抗蟲棉”的科技研究，成功地將某種能產(chǎn)生抗蟲毒蛋白的細菌的抗蟲基因?qū)�入棉花細胞中，得到的棉花新品種對棉鈴蟲的毒殺效果高達80%以上．
應(yīng)用Ti質(zhì)粒的原因是其上的T-DNA可轉(zhuǎn)移到受體細胞并整合到受體細胞的基因組DNA上，因此攜帶外源基因的DNA片段必須插入到植物細胞染色體上（部位）．
（6）在基因工程的第四步中，要檢測轉(zhuǎn)基因生物的目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA，采用的方法是分子雜交技術(shù)．

Answer 1

分析 基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成．
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法．
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）基因工程的核心步驟是基因表達載體的構(gòu)建．
（2）構(gòu)建基因的表達載體時，需要用DNA連接酶將目的基因和運載體連接起來．
（3）利用PCR技術(shù)擴增目的基因的前提，是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根據(jù)這一序列合成引物．
（4）將目的基因?qū)�入微生物細胞常用感受態(tài)轉(zhuǎn)化法，即用 Ca²⁺（或CaCl₂）處理受體細胞，使其成為能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細胞．
（5）農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化的原理：農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒上的T-DNA可轉(zhuǎn)移至受體細胞，并且整合到受體細胞染色體的DNA上．根據(jù)農(nóng)桿菌的這一特點，如果將目的基因插入到Ti質(zhì)粒的T-DNA上，通過農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化作用，就可以把目的基因整合到植物細胞中染色體的DNA上．
（6）檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出mRNA可采用分子雜交技術(shù)．
故答案為：
（1）基因表達載體的構(gòu)建
（2）DNA連接酶
（3）引物
（4）Ca²⁺（或CaCl₂）    感受態(tài)細胞
（5）T-DNA      染色體
（6）分子雜交技術(shù)

點評 本題考查基因工程的相關(guān)知識，要求考生識記基因工程的原理、操作步驟，掌握各操作步驟中需要注意的細節(jié)，能結(jié)合所學(xué)的知識準(zhǔn)確答題．