Question

【題目】CAR-T 是一種免疫細胞療法，通過改造人體自身的免疫 T 細胞，實現(xiàn)對癌細胞精確化、個體化的治療。下圖是該療法的原理示意圖。請結(jié)合圖示，回答下列問題：

（1）該療法的第一步需要從患者機體采血，分離出 T 細胞，放入_____________ （儀器）中保溫培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養(yǎng)成分外，往往還添加動物血清，原因是 _________。

（2）然后，在體外利用一種樹突狀細胞（可以呈遞癌細胞抗原的一種吞噬細胞），將 T 細胞激活，使其增殖并分化為________ 。

（3）理論上，構(gòu)建的基因組文庫中含有生物的 ______基因。在體外利用 DNA 重組技術(shù)，將編碼癌細胞抗原受體（AR）的基因插入到某種病毒的 DNA 中，使病毒作為 AR 的____________，在感染激活的 T 細胞時，將 AR 基因整合到 T 細胞的_____ 中。

（4）T 細胞表面嵌合了 AR，就成為 CAR-T 細胞，通常采用 ______________________ 技術(shù)檢測AR 基因是否在 T 細胞中轉(zhuǎn)錄成功。CAR-T 再經(jīng)過必要的質(zhì)量檢測，回輸至患者體內(nèi)，該方法采用的是自身 T 細胞，而不用異體 T 細胞，其原因是______。

Answer 1

【答案】二氧化碳培養(yǎng)箱 動物血清營養(yǎng)成分比較齊全，可以彌補人工培養(yǎng)基的不足 記憶細胞和效應T細胞 全部 （運）載體 染色體DNA 分子雜交 避免（免疫）排斥反應

【解析】

1、基因文庫是指將含有某種生物不同基因的許多DNA片段，導入到受體菌的群體中儲存，各個受體菌分別含有這種生物的不同基因�；�因組文庫包含某種生物所有的基因；部分基因文庫包含某種生物的部分基因，如：cDNA文庫。

2、基因表達載體的構(gòu)建：①過程：用同一種限制酶切割目的基因和運載體，再用DNA連接酶將目的基因和運載體連接形成重組DNA分子。②目的：使目的基因在受體細胞中穩(wěn)定存在并且可以遺傳給下一代并表達和發(fā)揮作用。③基因表達載體的組成：目的基因+啟動子+終止子+標記基因。

3、將目的基因?qū)�入受體細胞：根據(jù)受體細胞不同，導入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物細胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物細胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物細胞的方法是感受態(tài)細胞法。

4、目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

5、動物細胞培養(yǎng)的條件：（1）無菌無毒的環(huán)境，可以進行滅菌處理和加入一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液，避免代謝產(chǎn)物的積累；（2）營養(yǎng)條件：添加糖、氨基酸、促生長因子、無機鹽和微量元素等，除外一般還需要添加血清、血漿等；（3）溫度和pH值（4）氣體環(huán)境：95%的空氣和5%的二氧化碳。

（1）分離出 T 細胞，進行動物細胞培養(yǎng)的過程應該將細胞放入二氧化碳培養(yǎng)箱中保溫培養(yǎng)。在培養(yǎng)過程中除了添加糖、氨基酸等必要的營養(yǎng)成分外，往往還添加動物血清或血漿等天然成分，因為動物血清營養(yǎng)成分比較齊全，可以彌補人工培養(yǎng)基的不足。

（2）根據(jù)題意，樹突狀細胞為可以呈遞癌細胞抗原的一種吞噬細胞，因此抗原經(jīng)過吞噬細胞處理后呈遞給T細胞，引起T細胞的增殖與分化形成效應T細胞和記憶細胞。

（3）基因組文庫中含有某種生物的全部基因。在體外利用DNA 重組技術(shù)，將編碼癌細胞抗原受體（AR）的基因插入到某種病毒的DNA中，可見病毒作為AR的載體將其運輸?shù)绞荏w細胞（T細胞），導入受體細胞后將AR基因插入到T細胞染色體的DNA上。

（4）檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄，可以采用分子雜交法，即以AR基因作為探針與從受體細胞取出的總mRNA進行雜交，觀察有無雜交帶的出現(xiàn)即可。CAR-T 再經(jīng)過必要的質(zhì)量檢測，回輸至患者體內(nèi)，該方法采用的是自身T細胞，而不用異體T細胞，以避免發(fā)生免疫排斥反應。