Question

【題目】運用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，將奶牛細(xì)胞中編碼凝乳酶的基因轉(zhuǎn)移到大腸桿菌細(xì)胞中，達到大規(guī)模生產(chǎn)凝乳酶的目的。如圖表示用作運載體的質(zhì)粒和目的基因所在DNA片段。下列操作與實驗?zāi)康牟环�的是�?/span> ）

A.用限制酶BamHⅠ、PstⅠ和DNA連接酶構(gòu)建基因的表達載體

B.用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的即為導(dǎo)入目的基因的細(xì)菌

C.可用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞

D.用Ca2+處理大腸桿菌使其易于轉(zhuǎn)化

Answer 1

【答案】B

【解析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫中獲取、利用PCR技術(shù)擴增和人工合成。
（2）基因表達載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達載體包括目的基因、啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入動物�?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。
（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等。

A、由于EcoRI會破壞外源DNA中的目的基因，所以用限制酶BamHI、PstI和DNA連接酶構(gòu)建基因的表達載體，A正確；
B、在形成重組質(zhì)粒時，破壞了抗四環(huán)素基因，但抗氨芐青霉素基因完好，因此成功導(dǎo)入重組質(zhì)粒的理想大腸桿菌在含氨芐青霉素的培養(yǎng)基上能正常生長，在含四環(huán)素的培養(yǎng)基上不能正常生長，所以只用含氨芐青霉素的培養(yǎng)基篩選出的不一定為導(dǎo)入目的基因的細(xì)菌，也可能是導(dǎo)入普通質(zhì)粒的細(xì)菌，B錯誤；
C、可用DNA分子雜交鑒定目的基因是否已導(dǎo)入受體細(xì)胞，C正確；
D、將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞時，常用Ca2+處理細(xì)胞，使之成為易于吸收周圍環(huán)境中DNA分子的感受態(tài)細(xì)胞，D正確。
故選B。