Question

14．如圖甲、乙，箭頭表示限制酶的酶切位點(diǎn)，amp^R表示氨芐青霉素抗性基因，neo^R表示青霉素抗性基因．現(xiàn)有MboI、SamI兩種限制酶，它們的識(shí)別序列和酶切位點(diǎn)分別為↓GATC、CCC↓GGG．據(jù)圖回答下列問(wèn)題：
（1）獲取目的基因是基因工程的第一步，目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子．在目的基因的一條鏈上，相鄰的兩個(gè)堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接．
（2）利用限制酶MboI和SamI分別對(duì)甲、乙進(jìn)行酶切，若用E•coli DNA連接酶進(jìn)行連接，則可以得到1種重組質(zhì)粒；若用T₄DNA連接酶進(jìn)行連接，則可以得到2種重組質(zhì)粒．
（3）要使目的基因在受體細(xì)胞中，能正常表達(dá)和發(fā)揮作用，表達(dá)載體必須具備的結(jié)構(gòu)是啟動(dòng)子、終止子．

Answer 1

分析 1、基因工程的工具：
（1）限制酶：能夠識(shí)別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列，并且使每一條鏈中特定部位的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂．
（2）DNA連接酶：連接的是兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵．
（3）運(yùn)載體：常用的運(yùn)載體：質(zhì)粒、噬菌體的衍生物、動(dòng)植物病毒．
2、基因工程技術(shù)的基本步驟：
（1）目的基因的獲�。悍椒ㄓ袕幕�因文庫(kù)中獲取、利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成．
（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟，基因表達(dá)載體包括目的基因、啟動(dòng)子、終止子和標(biāo)記基因等．
（3）將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)�入植物�?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)�入�?dòng)物細(xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)�入微生物�?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法．
（4）目的基因的檢測(cè)與鑒定：分子水平上的檢測(cè)：①檢測(cè)轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測(cè)目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測(cè)目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)．個(gè)體水平上的鑒定：抗蟲(chóng)鑒定、抗病鑒定、活性鑒定等．

解答 解：（1）目的基因主要是指編碼蛋白質(zhì)的基因，也可以是一些具有調(diào)控作用的因子．由于目的基因是DNA的片段，所以在目的基因的一條鏈上，相鄰的兩個(gè)堿基之間依次由脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖連接．
（2）由于E•coliDNA連接酶只能連接雙鏈DNA的黏性末端，而T₄DNA連接酶既可以連接雙鏈DNA的黏性末端，又可以“縫合”雙鏈DNA的齊平末端，所以若用E•coli DNA連接酶進(jìn)行連接，則可以得到1種重組質(zhì)粒；若用T₄DNA連接酶進(jìn)行連接，則可以得到2種重組質(zhì)粒．
（3）要使目的基因在受體細(xì)胞中，能正常表達(dá)和發(fā)揮作用，表達(dá)載體必須具備的結(jié)構(gòu)是啟動(dòng)子、終止子，此外還有目的基因和標(biāo)記基因．
故答案為：
（1）編碼蛋白質(zhì)的基因  脫氧核糖、磷酸、脫氧核糖
（2）1   2
（3）啟動(dòng)子、終止子

點(diǎn)評(píng) 本題結(jié)合題圖，考查基因工程的相關(guān)知識(shí)，意在考查學(xué)生分析題圖提取有效信息的能力；能理解所學(xué)知識(shí)要點(diǎn)，運(yùn)用所學(xué)知識(shí)解決問(wèn)題的能力．